大鼠心肌缺血_再灌注损伤模型的改进与评价.docVIP

第 6卷　第 4期解剖科学进展 2000年 PRO GR ESS O F ANA TOM ICAL SC IEN CES 2000 大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的改进与评价 王淑侠　兰小莉1　王吉文2　裴著果 (中国医科大学第二临床学院核医学科　沈阳 110003) 　　摘要　大鼠心肌缺血再灌注损伤是模拟人类心梗及溶栓再通治疗,研究缺血预适应机制,评价抗心律失 常药物疗效常用的动物模型。本文在传统造模方法的基础上进行了一定的改进,采用在压管下加一小垫片的 方法,减少了传统推管法对心表面的机械损伤,方法简便,冠脉阻断确实。结果:大鼠左冠状动脉主干缺血 30′再灌 120′危险区左室重量比为 55%± 5% ,坏死区危险区为 58%± 6% (N = 10)。心肌酶谱结果: 关键词　心肌再灌注损伤;大鼠;模型, T TC染色法 　　阻断冠状动脉造成急性心肌梗塞并在预定时间 2∶1,压力在 5～ 15cm H 2O之间。根据呼吸频率及 内恢复血供予以再灌注是模拟人类心梗及溶栓再通深度调整呼吸参数 (鼠的气管插管可用一次性塑料 治疗常用的实验研究方法。大鼠以其冠脉侧支循环滴管拉制)。右颈总动脉插管,监测动脉血压。胸骨 缺乏、心肌坏死出现早、心律失常发生率高、重复性、 稳定性好、费用低廉而成为制作该疾病模型[ 1 ] ,特别拉两侧肋骨代替开胸器 (对于 270g以下的鼠,需剪 是硕、博士研究生进行课题实验首选的实验动物。笔 者在进行心肌缺血预适应机制的研究中,参照以往 轻轻向上推开,暴露动脉圆锥与左心耳根部间的左 型的制作方法进行了一定的改进,现报告如下: 射性跳动过猛,血管反而暴露不清楚。以左冠状静脉 为标志,用 3 8圆 3×10不锈钢圆针, 3～ 0丝线在 左冠状静脉下缝一针。进针深度应穿过心肌 1mm 健康雄性 W ista r大鼠,体重 240～ 350g (由中 右。采用笔者自行改良的推管法行左冠状动脉缺血 再灌注。即先将线的两端穿过一厚 1mm ,直径约 呼吸机 (浙江医科大学医学仪器实验厂) ;自制简易 血压计 (由 24号套管针、三通开关、U形管内装水 的两线头。用纹式钳向下推动硬塑管,使其连同小垫 由上海第三试剂厂生产;批号 970924用前以 线造成再灌注。以左室前壁紫绀或称蓝紫色及同步 兰 ( Evan s B lue )瑞士 F luka公司出品。电子天平 志。复灌时左室前壁缺血区紫绀消失。 显微镜。 缺血再灌结束后,再次结扎阻断的左冠状动 以 3%戊巴比妥钠按 50m g kg腹腔注射。气管 脉,静脉内注入 2% Evan s B lue 1m l。待鼠口唇兰染 后,取下心脏,剔除心房右室,左室 - 20℃冻 5～ 　中国人民解放军第 202医院心内科片。置预温 37℃, 1% T TC磷酸缓冲液中染 5～ 2 ?372?  解　剖　科　学　进　展  2000年第 6卷第 4期 缺血未坏死心肌 (濒危心肌)呈红色。待色差明显后, 取出左室断面,置 10%甲醛溶液中,固定 1～ 2h。采 用中国医科大学实验设备处的计算机图象分析系统 用数码相机拍照。然后在 o lym p u s 10实体显微镜下 计算危险区左室,坏死区危险区的重量比。 再灌结束后,自下腔静脉取血 2m l,分离血清, 检测心肌酶谱。即肌酸磷酸激酶 CK及其同功酶 限公司生产。 2　结果 心肌缺血再灌血压、心率及心电图表现。冠脉 结扎后,血压一过性下降,心率先略增快,后随时间 与 Q R S波融合, Q R S波增宽、增高、心律失常等。 Q R S波幅随着时间的延长可逐渐变小,心律失常以 一过性室早、室速多见。再灌瞬间, Q R S波再次增 高、增宽。心律失常类型与结扎相同。心脏直视,结 扎瞬间,左室前壁紫绀,或称兰紫色。复灌后紫绀消 失。 图 1　大鼠左心室中部横断面 T TC染色法显示危险区与坏 死区 心肌缺血、坏死范围。左冠状动脉主干结扎 30 m in,再灌 120 m in,危险区左室为 55%±5% ,坏死 区危险区 58%±6% (N = 10)。图 1中兰染色区为 非缺血区 (兰色经 T TC孵育,变为黑红色)主要在 空间隔部位,左室前壁、侧壁大部分已坏死,近心腔 的内壁,空间隔前 1 3为濒危心肌。 心肌酶谱。左冠状动脉主干结扎 30 m in,再灌  LDH 2329±216u L , A ST 371±57u l (N = 5)。 3　讨论 及压管法。推管法即将线穿过管,通过提线推管,压 迫冠脉实现。压管法即将管放置在心表面,将线系在 管上阻断冠脉。传统的推管法硬塑管直接抵压心表 面,鼠心率约 400次分