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谱柱常见问题解答 FAQs for column users By CSD AEs PDF created with pdfFactory trial version 1.液相色谱柱柱压升高问题 成柱压升高的可能原因有很多。一般是由于色谱柱筛板或柱头发生了堵塞， 成流动相阻 力加大所引起。当然色谱系统其他部分发生堵塞，也可能表现为柱压 （系统压力）升高。所 以在发现系统压力升高时，可首先使用两通短接色谱柱观察相同条件下系统本压是否正常， 排除压力升高为系统其他部分造成。 † 色谱柱筛板堵塞，这往往是由于流动相没有过滤，或虽已过滤但滤膜孔径过大或滤片损 坏，使固体杂 滞留在筛板上 成的。可采用反冲的方法去除堵塞物。对于5 或3.5um 填料的色谱柱，建议采用 0.45um 膜厚过滤样品，1.8um 填料的色谱柱，请采用 0.2um 膜厚过滤样品。 n 同样类似堵塞也会发生于排气阀过滤芯、在线过滤器和保护柱，这时建议更换滤芯， 在线过滤器内的筛板或保护柱内的柱芯。 † 非特异性吸附 当部分组分在柱子上有较强的非特异性吸附，且当前所用的流动相难以 将它们洗脱时，强保留组分的累积则会 成阻力增大和压力升高。可使用适当的溶剂冲 洗以除去吸附物 。 † 样品的沉淀 当样品所用的溶剂与流动相不一致时，样品进入柱中时有可能因溶解度降 低而沉淀出来， 成压力升高。此时建议使用对样品有较高溶解度的溶剂冲洗。 † 盐晶体的析出 使用较高浓度的缓冲液或添加有缓冲液的流动相后，如果冲洗不彻底， 缓冲液中的无机盐成分可能会残留在体系之中。它们会因在新流动相体系中溶解度降低 而析出，造成流动相阻力加大，压力升高。 † 更换流动相时置换不彻底 当改换流动相体系时，不彻底的更换使不同性 、互不相溶 的流动相 在一个体系中，也会 成压力升高。可使用混溶的溶剂（异丙醇）彻底冲洗。 备注： 安捷伦液相色谱柱冲洗建议 反相色谱柱 用以下溶剂至少各25mL 冲洗色谱柱(分析柱) 不含缓冲盐的流动相 100% 甲醇 100%乙腈 75%乙腈+25%异丙醇 100%异丙醇 100%二氯甲烷 * 100% 己烷* *若使用己烷或二氯甲烷冲洗色谱柱, 则在重新使用反相流动相以前, 必须用异丙醇冲洗色 谱柱 !!! 正相色谱柱 用以下溶剂至少各50mL 冲洗色谱柱(分析柱) 50% 甲醇+50%三氯甲烷 100%乙酸乙酯 除有特殊说明外，安捷伦的液相色谱柱在柱头发生堵塞时可以反冲。 PDF created with pdfFactory trial version 2.液相色谱柱保留时间变化 保留时间不重现可能由多种因素引起，通常还会影响到峰面积的重现性，建议检查以下几个 方面： † 确认流动相是新鲜配制的，比例没有错误。比如一些挥发性的溶液，如乙
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