人骨形成蛋白9基因修饰的兔骨髓间充质干细胞异位成骨实验研究.pdfVIP

四川 大 学 学 报 医 学 版 2008; 39 5 : 723 - 727 J Sichuan Un iv M ed Sc i Edi 人骨形成蛋白9 基因修饰的兔骨髓间充质 干细胞异位成骨实验研究 △ 江　标, 李　明 , 曹豫江 重庆医科大学附属儿童医院 骨科 重庆 400014 【摘要】　 目的　探讨人骨形成蛋白9 hum an bone mo rphogenetic 9, hBM P 9 基因治疗与骨组织工程技术相 结合的可行性。方法　采用阳离子脂质体介导hBM P 9 基因转染兔骨髓间充质干细胞 m esenchym al stem cells, , 荧光显微镜观察及流式细胞学检测, 碱性磷酸酶 活性定量测定及 ’钙结节染色; M SC s AL P V on Ko ssa s M SC s 与聚乳酸羟基乙酸 , 支架共培养, 荧光显微镜及扫描电镜观察 在 上 po lylactide co glyco lide PL GA M SC s PL GA 的黏附、生长情况; 将转染与未转染 9 基因的 分别与 支架复合培养, 构建组织工程化骨并回植 hBM P M SC s PL GA 兔肌肉内, 组织植入4、8 周后进行H E 染色观察。结果　流式细胞仪测定质粒转染率为34. 15% ; 转染组M SC s 的 活性较未转染组明显增高 0. 01 , ’钙结节染色比较转染细胞形成的钙结节明显大于未转染 AL P P V on Ko ssa s 组; 荧光显微镜及扫描电镜观察见 在 支架上的黏附、生长良好; 异位回植术后4、8 周组织 染色见肌 M SC s PL GA H E 肉内有新生骨基质分泌, 成骨面积定量分析转染组与对照组相比差异有统计学意义 P 0. 05 。结论　阳离子脂质 体介导的质粒能稳定转染 , 9 能刺激 的 活性增强, 诱导钙结节形成; 9 基因转染的 M SC s BM P M SC s AL P BM P M SC s 作为一种新型的种子细胞, 其与PL GA 支架复合用于骨缺损的修复具有较强的可行性。 【关键词】　骨髓间充质干细胞　BM P 9　PL GA 　组织工程 【中图分类号】　 782 R Ectop ic Bone Formation of Bone M arrow M esenchymal Stem Cells with Gene Tran sfer of Human Bone △ - 9 , , . M orphogenetic Prote in Gene in Rabbit J IA N G B iao L I M ing CA O Y u j iang D ep artm ent of P ed iatric , ’ , 400014, O rthop aed ics Ch ild ren s H osp ital of Chong qing M ed ical U niversity Chongqing Ch ina 【 】 9 Abstract Objective To investigate the m ethod com bining hBM P gene therapy w ith tissue engineering . techniques to imp rove o steogenesis in an ectop ic bone fo rm ation model in rabbits M ethods R abbit m arrow M SC s w ere transferred w ith BM P 9 gene by cationic lipo som e, and then w ere subjected to a series tests including , , ’ fluo rescent m icro scope F low cytom eter FCM AL P activity quantitative assay and V on Ko ssa s calcium nodus ; 9 staninig M SC s transfected w ith BM P gene successfully w ere seeded onto scaffo lds of po lylactide co glyco lide . . PL GA Cell m atrix interactions w ere observed w ith