木聚糖酶出发菌株LXY的筛选及产酶条件.docVIP

木聚糖酶出发菌株LXY-8的筛选及产酶条件考察 许海艳，卢衍花，张志云，李永胜，杨翔华* （辽宁石油化工大学环境与生物工程学院；辽宁抚顺，113001） 摘要：从近200份样品中分离筛选出酶活较高的木聚糖酶菌株LXY-8，经形态特征、生理生化鉴定其为根霉属。产酶最适条件为：温度30℃；木聚糖酶起始pH 4.6，纤维素酶初始pH 5.0；在pH2~7范围内，残余酶活保持在80%以上；Mg2+、Co2+、Na+、K+等金属离子对酶活有促进作用。 关键词：木聚糖酶，根霉属,酶学性质 中图分类号：Q939.9 文献标识码：A 文章编号： Screening of Xylanase strain and studies on its condition of producing enzyme XU Haiyan,LU Yanhua,ZHANG Zhiyun,LI Yongsheng,YANG Xianghua (College of Environment and Bioengineering, Liaoning Shihua University, Fushun 113001,China) ABSTRACT: separation, isolating and purification some stems of germ engendering xylanases through nearly 200 samples, we select the LXY-8 strain of highest xylanase activity. It was identified as Rhizopus. The studies on enzymacatic characterization indicate that the optimum conditions were: temperature is 30℃;initial pH of xylanase is 4.6，initial pH of cellulolytic enyme is 5.0；the remnant xylanase axtivity would be 80% when the pH vaule is 2～7; mental ion Co2+、Mg2+、Na+、K+ has simulative function to enzymic activity. Key words: xylanase, Rhizopus, enzymacatic characterization 玉米秸杆和玉米芯中富含半纤维素，其主要成分是木聚糖，但多未有效利用。VIS-7220型分光光度计、霉菌实验箱、LD5－10型离心分离机、无菌空气净化台、生化培养箱冰箱。 1.1.3 培养基组成 （1）马铃薯葡萄糖培养基（PDA）[2]：马铃薯 20g，葡萄糖2g，琼脂2g，水100ml。 （2）固体初筛培养基：6g玉米秸秆，2％的营养盐（g/L）（KH2PO4　3.0，CaCl2　0.5，MgSO47H2O　0.5，NaNO3　3.0，FeSO4·7H2O　7.5×10-3，MnSO4·H2O2.5×10-3，ZnSO4　2.0×10-3，CoCl2　3.0×10-3，自然pH值）r/min）培养6d，将培养液于4℃、4000 r/min离心分离15min，取上清液作为粗酶液。 2.3 木聚糖酶活测定[4] 3 结果与讨论 3.1菌种的分离筛选 从近200分土样、腐烂的玉米芯、玉米秸秆及牛胃、牛粪[5]中分离纯化出LXY-1、LXY-2、LXY-3、…、LXY-30，这30种菌在固体初筛培养基中都产生明显的半纤维素水解圈，说明对玉米秸秆做底物的木聚糖具有明显的降解作用。 测粗酶液中木聚糖酶活、纤维素酶活，从中选出酶活较高的5种菌株，结果见图1。 图1　木聚糖酶活和纤维素酶活力测定结果 如图1，LXY-8菌株产木聚糖酶和纤维素酶活力最高，分别达到3158u/ml.min、1885 u/ml.min。所以选择该菌株进行培养，并对其酶学性质进行研究。 3.2对LXY-8菌株产生酶性质的考察 3.2.1发酵起始PH值对产酶的影响 在不同pH值的0.2mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液中LXY-8水解木聚糖的活力不同。 图2 发酵起始pH值对木聚糖酶和纤维素酶活的活性的影响 如图2，LXY-8菌株在较低的pH环境中有利于木聚糖酶及纤维素酶的合成。木聚糖酶活在固体培养基初始pH为4.6时最高，可达4782 U/g，纤维素酶活在初始pH为5.0时最高，可达1885U/g。 3.2.2木聚糖酶酸碱稳定性的考察 图3木聚糖酶的稳定性的考察 如图3，LXY-8菌株产木聚糖酶在pH2~7范围内酸碱