胞质蛋白NOD2重组腺病毒载体的构建.pdfVIP

生垦匡荭2Q螋生Z旦筮璺鲞筮!魍鱼hi塑丛!查!i堡：型z兰Q堕：!丛：!。№：2 ．论著． 胞质蛋白NOD2重组腺病毒载体的构建 路会侠李绍波 【摘要】 目的构建人NOD2腺病毒表达载体。方法采用分子克隆技术，从CoCa2细胞DNA中 NA I和Not PCR扩增NOD2片段，经pcD3．1克隆到穿梭质粒pShuttle-CMV，以Kpnl双酶切重组穿梭质 EK 293细胞中包装成 粒，经电穿孔、抗性筛选，重组成pAdCMV—NOD2腺病毒质粒，经酶切鉴定正确后，在H 为重组rvAdCMV-NOD2腺病毒，并进行PCR鉴定测定。结果成功扩增目的基因并鉴定，重组穿梭质粒 pShuttle-CMV．NOD2鉴定，经酶切鉴定证实重组腺病毒质粒构建成功。结论腺病毒载体应用广泛。细菌体 内同源重组腺病毒pAdCMV．NOD2合成效率高，为炎症的基因治疗研究奠定基础。 【关键词】 腺病毒载体；核苷酸结合寡聚化结构域；核苷酸结合寡聚化结构域蛋白2 【中图分类号】Q7【文献标识码】A【文章编号】1673-4777(2009)07-0501-03 Constructionofrecombinantadenoviralvector NOD2￡￡，肌i．xia‘．LI carrying Shoo．bo．’Departmemof ofClinicalMedicine，Dali 671000，China GynaecologyObstetrics，FacultyUniversity，Dali Correspondingauthor：LUHui．xia，Entail：luhuix淄BJ∞J@yahoo．corn．cn Toconstructadenovirusvector tlleNOD2 for 【Abstract】Objeetive containing genestudyingtherapeutic was inflammationdi8ea∞．MethodsNOI)2obtainedfromhumanCoCa2DNAbasedon moleculeclonetech． Adopt was into furtherclonedinto then cloned nique，and plasmidpcDNA3．1(+)and plasmidpShutfle-CMV，pShutfleC— MV．NOD2with of IandI．NotI．TlIlerecombinantadenoviral and double Wasidentified digestionPI．Kpn plasmid transferredintotheadenoviraJ cellHEK293 2000mediatedtransfermethod．The packaging bylipofectamine gene recombinantadenoviusWa$confirmed chain Therecombinant bypolymerasereaction(PCR)．ResultspAdeno． NOD2was constructedandconfirmedrestrictionendonuclease transfenedHEK293cells c