A549／TaxR多药耐药细胞系的建立.pdfVIP

维普资讯 第34卷 第3期 曲 阜 师 范 大 学 Vo1．34 No．3 2008年 7月 Journal of Qufu Normal July2008 A549／TaxR多药耐药细胞系的建立 赵云峰①， 宋加金② (① 曲阜师范大学生命科学学院；② 曲阜师范大学科研处，273165，山东省曲阜市) 摘要 ：采用大剂量冲击与逐步增加剂量相结合，通过210d建立了人肺腺癌多药耐药细胞系A549／ TaxR．M1Tr法测定A549／TaxR的药物敏感性 ，对紫杉醇的耐药指数是24．79，对丝裂霉素 C、5一氟尿嘧啶、长 春新碱、表阿霉素、足叶乙甙、顺铂及卡铂等药物有不同程度的耐药性 ，但对卡氮芥和吉西他滨无耐药性．本研 究建立了稳定的人肺腺癌细胞系 (A549／TaxR)，可用于下游的实验研究． 关键词 ：人肺腺癌A549细胞；多药耐药；GSTs；耐药指数 中图分类号：R7342 文献标识码 ：A 文章编号：1001．5337(2008)03-0101-04 据WTO统计，肺癌是当今世界上最大的癌患， 人肺腺癌细胞系 A549购于美 国ATCC．A549 其死亡率居于各种恶性肿瘤之首 ，中国也 已成为世 细胞在含有 10％小牛血清、青霉素和链霉素各 100 界上第一肺癌大国．多数肺癌需进行化疗为主的综 U／L的RPMI1640培养液中，置于37℃、5％CO2、 合治疗，多药耐药是肺癌化疗失败的主要原因¨卫J， 饱和湿度培养箱中培养． 建立多药耐药细胞系是体外研究肿瘤多药耐药性和 1．2 主要试剂 提供克服耐药措施的基础 ．紫杉醇 (Tax)作为治 顺铂、卡铂、足叶乙甙(VP一16)(齐鲁制药有限 疗非小细胞肺癌最有效的药物之一，同样也面临着 公司)，丝裂霉素 c、紫杉醇、表阿霉素 (Sigma公 耐药问题H．本研究用紫杉醇诱导 A549细胞建立 司)，卡氮芥、长春新碱、5一FU(山东蓝金生物工程 A549紫杉醇耐药细胞系(A549／TaxR)． 有限公司)，吉西他滨 (法国礼来公司)，DMEM、胎 多药耐药的产生是一个复杂的过程，简述如下： 牛血清(Gibco公司)，胰蛋 白酶 (Amresco公司)，二 肿瘤细胞对一种化疗药物产生耐药性后 ，对其它 的 甲基亚砜 (FisherScientific公司)，噻唑兰 (M1Tr)、 多种化疗药物也产生不同程度的药耐性，致使药物 的疗效不断的下降…．MDR的生物学机制在于肿 RNAaseA、PI(Sigma公司)，GSTs检测试剂盒 (南 瘤细胞多次接触化疗药物后，诱导肿瘤细胞的膜结 京建成生物公司)． 构发生改变，使药物不易进入细胞 内；诱导肿瘤细胞 1．3 方法 的MDR1基因过度表达 ，该基因编码 的蛋 白质起着 1．3．1 耐药细胞的诱导 一 种生物泵的作用，能将进入肿瘤细胞的化疗药物 采用大剂量冲击与逐步增加剂量相结合的方法 不断地泵出肿瘤细胞，这时只有提高药物浓度才有 诱导．用终浓度为20nM的Txa 与A549细胞共同培 可能达到原来的疗效；诱导药物代谢酶的活性增加， 养48h，更换培养液，以含5nMTxa 的培养液培