细胞生物学实验 wang.pptVIP

一、实验目的 1、学习研究细胞凝集反应的方法 2、了解细胞发生凝集反应的原因 二、实验原理 凝集素 :一类可逆结合特异糖基的蛋白质，与糖的运输、储存物质的积累、细胞间的互作以及细胞分裂的调控有关。 细胞凝集：凝集素与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”，加入与凝集素互补的糖分子可以抑制细胞间的凝集反应 性质： 为糖蛋白(少数例外) 凝集反应所必需的金属离子：Ca2+和Mg2+ 所含糖种类在动物、植物和微生物中不同 　 特异性： 一种凝集素具有对某一种特异性糖基专一性结合的能力，如： 刀豆素与α—D—吡喃糖基甘露糖结合; 麦芽素与N—乙酰糖胺结合; 菜豆凝集素与N—乙酰乳糖胺结合 功能： 参与细胞的识别和粘着 在植物生长的各个阶段，凝集素以不同的方式保护植物免受害虫的侵害 作为氮源：凝集素在储藏器官和繁殖器官中的含量尤其丰富 凝集素的应用： 1.作为细胞分化和成熟的标记 2.作为细胞特殊类型的标记 3.作为肿瘤诊断的标记 三、实验材料与用品 实验材料：马铃薯块茎，韭菜叶片 试剂： (1)磷酸缓冲液：pH 7.2 (2)生理盐水：0.9％氯化钠无菌水溶液 (3)硫酸铵 (4)石英砂 仪器与器材： 离心机，光学显微镜 研钵，药匙，纱布，离心管，带刻度, 滴管，烧杯，玻璃棒，量桶，载玻片，盖玻片，滤纸，吸水纸。 四、实验方法 ① 2% 鸡红细胞悬液制备?????以无菌方法抽取鸡翅下静脉血液（5mL注射器用1%肝素溶液浸润）1mL，用生理盐水洗3次，每次1500 r/min，离心5 min，最后按沉淀压积的红细胞体积用生理盐水配成2％红细胞悬液 。 ? ② 称取土豆去皮块茎4g，切成小块， 5 mL PBS ↓ 加石英砂，研磨，浸泡1.5h ↓ 载玻片上滴一滴浸泡液  ↓ 再滴一滴2％红细胞液，充分混匀  ↓静置10 min  ↓ 低倍显微镜下观察血细胞凝集现象 以PBS加2％血细胞悬液作为对照实验，低倍显微镜下观察  ? （3） 称取韭菜叶片5g，切成小片 5 mL 生理盐水  ↓ 研磨，过滤， 离心（5000r/min）20 min，留上清液 ↓ 上清液加相应硫酸铵至60%饱和度（边加入边用玻璃棒搅拌至完全溶解），离心（5000r/min）20 min，沉淀用1ml磷酸缓冲液溶解  ↓ 载玻片上滴一滴韭菜凝集素  ↓ 再滴一滴2％红细胞液，充分混匀  ↓静置10 min  ↓ 低倍显微镜下观察血球凝集现象  不同饱和度硫酸胺沉淀蛋白质表 五、实验报告及作业 1.绘图表示血细胞凝集现象，并说明原因。 2.植物细胞凝集素在鸡红细胞凝集过程中起什么作用？ 3.哪些因素影响细胞凝集反应？ 实验7：叶绿体的荧光原位观察 一、实验目的 二、实验原理 荧光: 某些物质在—定短波长的光(如紫外光)的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光)，这种光就称为荧光 荧光显微术: 利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行观察的一种技术。 自发荧光: 生物体内的物质受激发光照射后直接发出荧光，如叶绿索的火红色荧光和木质素的黄色荧光等。 次生荧光: 有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光, 如叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧光。 三、实验材料与用品： 实验材料： 烟草、大葱叶片 试剂： 0.01%吖啶橙 0.9％氯化钠溶液 仪器与器材： 普通显微镜，荧光显微镜 刀片，眼科镊子（直头），载玻片，盖薄片，滴管，砂布， 四、实验方法: 1、普通显微镜观察叶绿体形态 1)徒手切片:用刀片将新鲜的叶片削出一斜面 沿斜面切下一薄层完整组织，置于载玻片上 滴加0.9％NaCl溶液 加盖片后轻压 置显微镜下观察，观察记录细胞中叶绿体的形态、数目和分布状况 普通显微镜观察叶绿体形态 2) 表皮条 撕表皮 滴加0.9％NaCl溶液 加盖片后轻压 置显微镜下观察，观察记录细胞中叶绿体的形态、数目和分布状况 2、叶绿体自发荧光观察 相同方法制备叶片徒手切片和表皮条 置荧光显微