黄连盐酸小檗碱提取和分离.docVIP

黄连盐酸小檗碱提取和分离 08中药保健产品方向一班 朱琼花 0806504124 2010-12-11 一、背景资料 黄连(Coptis chinensis Franch)的根茎。主要含小檗碱 (berberine)5%~8%、还含有黄连碱 (coptisine)、巴马亭(palmatine)、 药根碱(jatrorrhizine)、 木兰碱(magnoflorine)等成分。主要用于清热燥湿, 泻水解毒。 用于湿热痞满、 呕吐、 泻痢、 黄疸、 高热神昏、 心烦不寐、 血热吐衄、 牙痛、 痈肿疔疮的治疗。目前有文献报道的黄连中盐酸小檗碱检测方法主要有薄层扫描、 荧光分析法、高效毛细管电泳法。 二、概述 黄连中盐酸小檗碱含量测定中国药典 2005 年版一部采用方法为薄层色谱- 荧光分光光度法展开条件为苯- 乙酸乙酯- 异丙醇- 甲醇-水( 6:3:1.5:1.5:0.3) 为展开剂, 另槽加入等体积的浓氨试液, 预平衡15min, 展开至 8cm。荧光扫描激发波长 λ =366nm。据有关文献报道该方法 RSD%为 2.14, 回收率 96.5%。因为薄层色谱—荧光扫描法检测受薄层板、 点样器、 人员等影响较大, 不容易使样品平行, 通常需要做多个样品, 导致检测耗时较长, 不适用于生产控制。 且检测中使用展开剂含有大量苯, 对环境及检验人员健康都存在不良影响。 三、原理 小檗碱又称黄连素，为黄连主要有效成分，其含量约为 4%~10%但根据野生和栽培产地的不同,其含量各异。小聚碱是黄色针状结晶体,能缓慢溶于水（1:20），乙醇（1:100），较易溶于热水、热乙醇,微溶于丙酮、氯仿、苯,几乎不溶于石油醚中。小檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能溶于水中，其水溶液有三种互变形式。 季铵式（红棕色） 醇式（黄色） 醛式（黄色） 小檗碱（黄连素） 四、方法与检识 1、提取 称取黄连粗粉30克，加0.3%H2SO4 200ML，超声波提取1h，棉花过滤，加石灰乳调PH至10以上，过滤，滤液用稀盐酸调PH至3，加入含盐量约7%食盐，搅拌使溶解，放置析晶15分钟，抽滤，滤渣用蒸馏水洗3次，得粗品。 2、TLC分离（1） 取上述提取的粗品用乙醇适量溶解，备用。硅胶G、0.3%CMC-NA 按1：3.5 比例研磨均匀手工铺板，板的规格为10*20cm，105℃活化1h，干燥器中放置一晚，带状点样，以正丁醇- 冰乙酸- 水（7 ∶1 ∶1 ）展开高度约为12cm，取出，晾干，在紫外灯下（365nm）观 察， 在与对照品盐酸小檗碱对应的色带处用铅笔圈出来，将该色带刮下来，置三角瓶中，用乙醇洗至硅胶粉无色为止，然后将乙醇液浓缩至一定体积（备用）。 2、TLC分离（2） 以苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-氨(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)为展开剂, 展开前用氨水饱和 15m in, 展距为 13cm , 晾干后置紫外灯(365nm )下检视, 小檗碱呈现黄绿色荧光斑点(Rf =0.137)。 2、TLC分离（3） 用0.3%CMC-Na为粘合剂自制硅胶G板,取对照品溶液适量,点样后用氨水饱和30 min,以苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-氨水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)为展开剂,展距 10 cm,晾干后置紫外光(365 nm)下检视,盐酸小檗碱呈黄绿色荧光斑点(Rf＝0.40) 2、TLC分离（4） 采用自制硅胶G板.其制作过程如下:取适量的硅胶 G粉溶于适量的蒸馏水中搅拌, 铺平在 玻璃板上, 厚薄适度, 晾干, 于烘箱内(105~110)活化半个小时后取出,放冷,点样,待样点干后放入层析缸中以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10：7：1：1)为展开剂，将其展开, 展开距离约 170mm. 取出晾干后在365n m紫外灯下定位, 盐酸小檗碱呈现黄绿色荧光斑点(Rf值约为0.48).在此条件下,盐酸小檗碱斑点圆整,无拖尾现象。 五、实验说明及注意事项 1．以硫酸盐代替盐酸盐，可增加生物碱的浸出量。 2．盐析最佳用量为4～5％。 3．凡能用TLC分离的混合物，把TLC条件直接用在干柱上，可迅速获得制备性分离。简单讲干柱色谱是把吸附剂按干法装在柱中，欲分离的混合物吸着在干柱的顶端，用溶剂洗脱，待溶剂达到柱底为止。以荧光定性或以化合物在薄层上的Rf值推定位置，根据各个成分的位置进行分割，各段以有机溶剂提取，即将各成分加以分离。 六、参考文献 [1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出 版社,2005.213. [2] 周华平,宋广聪,王仁英.薄层扫描法测定香连丸中盐酸小檗碱的含 量[J].基层中药杂志,2000,14