微生物学大实验终稿.pptVIP

微生物学实验 指导教师：任晓冬 单亚明 实验流程 相关理论知识（1） 微生物的分离与纯化 从混杂的微生物群体中获得只含某一种或某一株微生物的过程。 常用的分离、纯化方法 微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获取单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术完成。 相关理论知识（2） 土壤生境 土壤是微生物生活的大本营，所含微生物无论数量还是种类都极其丰富,因此,土壤是微生物多样性生长的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。本实验将采用不同的培养基从土壤中分离不同类型的微生物。 相关理论知识（3） 乳酸菌 乳酸菌是一类能在碳水化合物发酵过程中产生大量乳酸的细菌，在酸奶中大量存在。 乳酸菌形态 球形、类球状、短杆或杆状，有些细胞有芽孢。 代谢产物 以乳酸为主要代谢产物，有些乳酸菌可以产生乳链菌肽（Nisin)，乳链菌肽有抑菌活性。 目的要求 1、了解微生物分离和纯化的原理 。 2、掌握常用的分离纯化微生物的方法。 3、掌握倒平板的方法。 4、进一步熟练和掌握微生物的无菌操技术。 5、掌握微生物的培养方法。 实验原理（1） 微生物分离与纯化 从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程。 平板分离法 普遍用于微生物的分离与纯化。其基本原理是选择适合于微生物生长的培养条件（如营养成分、酸碱度、温度和氧等,或加入某种抑制剂），在平板上培养微生物，当平板上长出单菌落后，挑取，得到纯种的微生物  实验原理（2） 分离产Nisin的乳酸乳球菌时，要用选择性平板 能够产生Nisin的乳酸菌，自身会有对一定浓度的Nisin 的抗性，而很多其它的细菌不具有这种抗性。所以，在纯化乳酸乳球菌时，要在平板中加入一定量的Nisin,使得对Nisin没有抗性的其它细菌被抑制，平板中的单菌落就有更大的可能性是我们需要的乳酸乳球菌 采用在平板中加入抑制剂的方法是微生物学常用的分离纯化微生物的方法。 试剂与器材 1、材料 含大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉、根霉、青霉和放线菌的土壤样品及酸奶样品，牛肉膏蛋白胨培养基（斜面、液体、半固体）、马丁氏培养基、查氏培养基等 2、试剂 10%酚、4%水琼脂 3、器材 盛9mL无菌水的试管、盛90mL无菌水并带有玻璃珠的三角瓶、涂布器、无菌吸管、接种环，酒精灯、无菌培养皿、显微镜、细胞计数板等。 牛肉膏蛋白胨培养基 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂 15-20g 用水定容至 1000ml pH 7.0-7.2 用于分离细菌 查氏培养基 NaNO3 2g K2HPO4 1g KCl 0.5g MgSO4 0.5g FeSO4 0.01g 蔗糖 30g 琼脂 15-20g 用水定容至 1000ml 用于分离霉菌 高氏一号培养基 可溶淀粉 20g KNO3 1g NaCl 0.5g K2HPO4 0.5g MgSO4 0.5g FeSO4 0.01g 琼脂 15-20g 用水定容至 1000ml pH 7.2-7.4 用于分离放线菌 马丁氏培养基 葡萄糖 10g 蛋白胨 5g K2HPO4 1g MgSO4 0.5g FeSO4 0.01g pH 自然 用水定容至 800ml 用于分离酵母菌 M17培养基 蛋白胨 10 g 酵母粉 5 g