高磁场响应性蛋白偶联磁性微球的制备及其在药物-蛋白结合常数测定中的应用.pdfVIP

第43卷第8期 应 用 化 工 Vol.43No.8 2014年8月 AppliedChemicalIndustry Aug.2014 高磁场响应性蛋白偶联磁性微球的制备 及其在药物-蛋白结合常数测定中的应用 潘晓霞 （天津大学药物科学与技术学院，天津 300072 ） 以蛋白偶联磁性微球（MB）为固相基质，通过磁场下快速分离蛋白和上清，高效液相色谱法测定上清中的 摘 要： 药物浓度，建立了测定药物与蛋白结合常数（K 的新方法。选择对药物非特异性吸附较少和磁响应性较高的四氧 ） a 化三铁磁性微球为载体，分别以1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐/ N-羟基琥珀酰亚胺（EDC/NHS）及戊 二醛作为偶联剂，制备牛血清白蛋白（BSA）包覆的磁性微球（MB-BSA），两种偶联方法所得磁性微球的蛋白最大键 合量均为50 g/m 。以布洛芬为模型药物，研究药物在蛋白偶联磁性微球上的吸附行为及药物-蛋白的相互作用 μ 模式，优化药物吸附和解吸过程。利用高效液相色谱法测定经磁性分离的上清液中的游离药物浓度，通过罗森塔 尔方程计算药物与BSA结合常数。最后将所建立的方法应用到色氨酸、安立生坦、瑞替加滨、罗氟司特等4 种不同 药物与蛋白的结合常数的测定，获得满意结果。 关键词：磁性微球；牛血清白蛋白；药物-蛋白作用；结合常数 中图分类号：TQ021.9；O642 文献标识码：A 文章编号：1671-3206（2014）08-1531-05 Protein-coatedmagneticbeadsforthemeasurementof drug-proteinassociationconstant PANXiao-xia （SchoolofPharmaceuticalScienceandTechnology，TianjinUniversity，Tianjin300072，China） Abstract：Asimpleandfastmethodforthedeterminationoftheassociationconstant（K ）ofdrugstoser-a umalbuminhasbeendevelopedbyusingbovineserumalbumin-coatedmagneticbeads（MB-BSA）.Opti- mumtypeofMBwhichhasleastnonspecificadsorptioneffectwasscreened，themaximumamountofthe twoproteinbondcouplingmethod resultin gmagnetic microsphereareall50 g/mg.Thecrosslinkin μ methodwasalsooptimizedtogettheappropriateboundcapacityofBSA.Thentheadsorptionequilibrium timeanddrug-proteininteractionmodeusingibuprofenasthemodeldrugwasstudied.Finally，theKa for ibuprofen，tryptophan，ambrisentan，retigabineandroflumilastwerecalculatedviaRosenthalequationby detectingtheconcentrationof