生物制药--酶工程和手性药物.pptVIP

* * * 高效液相色谱拆分外消旋1-苯基乙醇类化合物 三苯甲酸酯纤维素手性色谱柱（CHIRACEL OB ，I.D. 4.6×250mm）拆分1-苯基乙醇、1-苯基丙醇、2-氯-1-苯基乙醇和2-溴-1-苯基乙醇外消旋化合物，可用于监测不对称催化氢化反应过程和测定产物对映体过剩值。（厦门大学学报，1998，37（2）：309） (S)-(-)苯乙醇 (R)-(+)苯乙醇 R：H，Cl，Br，CH3 合成聚合物与分子烙印手性固定相 合成手性聚合物CSP的制备主要通过三种途径： （1）在手性条件下不对称聚合； （2）采用手性单体； （3）手性分子烙印技术。 分子烙印(imprinting)手性固定相是在聚合过程中加入一个适当的模板(template)分子，然后从聚合物中除去模板分子，流下一个“形状选择性”(shape selectivity)孔穴，形成适合于孔穴立体选择的聚合物。 4.3.3 毛细管电泳 毛细管电泳(CE)是20世纪90年代在手性分离方面得到广泛应用和高度重视的一项高效能分离技术。毛细管电泳分离对映体的优点： ★ 高分离效率有利于难分离对映体拆分 ★ 手性选择剂的消耗量小，运行成本低 以毛细管电泳分离对映体为例说明如何提高物质的分离度，分离方法的优化途径。 思路：毛细管电泳和常规电泳比较； 对映体分离的特点。 毛细管电泳采用上万伏外电压进行电泳——增大外加场； 存在问题：焦耳热增大，使分离过程物质带的离散作用增大，即熵增，区带增宽。 毛细管电流较小，而散热面积很大，降低或抑制熵增； 使用手性添加剂或固定相，导致对映体间的淌度或分配系数差异增大。 1） 环糊精及其衍生物 环糊精及其衍生物常用作毛细管区带电泳手性添加剂。2） 2) 冠醚 Ｋuhn等将具有4个手性中心的18-冠6-四羧酸(18C6H4)作手性添加剂,对α氨基酸对映体，重酒石酸去甲肾上腺素，降麻黄碱，phenylglycinol等进行了分离。 3） 抗生素 Armstrong 等将大环抗生素利福霉素B用于毛细管电泳手性添加剂,对18种氨基酸类手性药物的对映体进行分离。最近他们发现糖肽类的抗生素ristocetinA ,teicoplanin ,vancomycin等具有非常广泛的对映体分离选择性,可对上百种对映体进行成功的分离。 4） 蛋白质 蛋白质也被成功地用于毛细管电泳手性分离。此外还有多糖，手性表面活性剂，旋光金属配合物等也用作手性选择剂。 毛细管区带电泳手性添加剂法分离异丙肾上腺素类药物 环糊精及其衍生物常用作毛细管区带电泳手性添加剂。 异丙肾上腺素为碱性化合物，在pH7.00时因质子化而带正电，其电泳方向与电渗流同向。 β-CD是电中性物质，随电渗流一起迁移。所以pH值越小，异丙肾上腺素与β-CD的迁移速度差越大，越有利于对映体的分离。 而CM-β-CD（羧甲基-）在背景电解质中发生电离而变为带有负电荷的阴离子，电泳方向与手性分子相反。 （王洪等，色谱， 1998， 16（1）：22） Fig. 16 The influence of acetonitrile on the separation of enantiomers 3 mm ODS, 50 mm I.D. capillary, 25.9cms packed, 52cms total length, Electrolyte: Acetonitrile/Phosphate buffer pH=6.5, Ratio a) 15:85, b) 20:80, c) 25:75, with 10mM HP- b -CD ( 1mM Na2 HPO4 , adjusted to pH=6.5 with concentrated H3PO4 ), Applied Voltage 15kV, Detection at 220nm. 区带电泳 Chlorthalidone 氯噻酮 is a drug exhibiting diuretic and hypertensive activity, but since it is neutral, its enantiomers cannot be separated by CZE using a neutral chiral selector. HPLC : Cyclobond I 2000 RSP column , CH3CN-70mM triethylamine (5:95 v/v) adjusted to pH 4.1 with acetic acid. Fig. Separatio