5-氮杂-2-脱氧胞苷联合SAHA对耐顺铂人肺腺癌细胞系A549-DDP的逆转作用及其机制.pdfVIP

塞旦匿堂盘查2111堡筮!!鲞笠!呈塑 5一氮杂一27一脱氧胞苷联合SAHA对耐顺铂人肺腺癌 细胞系A549／DDP的逆转作用及其机制 李辉段凤英 摘要 目的：探讨DNA甲基转移酶抑制剂5一氮杂一2’一脱氧胞苷(5-Aza—CdR)和组蛋白去乙酰化酶抑 制剂(suberoylanilidehydroxamic h后各组细胞耐药相关基因MDRl、LRPmRNA的表达；采用流式细胞术检测各组细胞 应(RT—PCR)检测48 的凋亡情况。结果：5-Aza—CdR和sAHA对A549／DDP细胞的无毒浓度分别为5 I,kmol／L和1p+mol／L．两者 均可使A549／DDP细胞对顺铂的IC50值下降，单独或联合应用时逆转倍数分别为1．6、1．8和4．6倍：经 5-Aza—CdR和SAHA处理后各组细胞MDRl、LRPmRNA表达均明显减弱，凋亡明显增强，且两者联合具有 协同作用，其作用机制可能与下调耐药相关基因MDRl、LRPmRNA的表达，减弱肺癌细胞对化疗药物的外 排作用有关。 关键词肺肿瘤； 顺铂； A549／DDP细胞；表观遗传学； 多药耐药基因1； 肺耐药蛋白 肺癌是当今世界最严重的恶性肿瘤之一，以铂 1材料与方法 类为基础的化疗是治疗中晚期非小细胞肺癌(non—1．1 细胞人肺腺癌A549细胞株为南昌大学第 smallcell 二附属医院重点实验室保存，A549／DDP细胞株购 cancer，NSCLC)的重要方法[¨。然而， lung 铂类耐药的产生常常导致化疗失败．是肺癌治疗中 自北京医科院肿瘤细胞库。 亟待解决的问题，研究逆转肿瘤耐药的有效药物已 1．2试剂与仪器DDP购于江苏豪森制药公司； 成为提高化疗疗效的焦点。研究发现，小剂量的 DNA甲基转移酶抑制剂(DNA methyhrans—ferase inhibitor．DNMTi)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂公司：AnnexinV—FITC／PI凋亡试剂盒为南京凯基 (histon inhibitor，HDACi)虽无直接的抗公司产品：PCR设备为Bio—Rad公司产品。 deacetylase 肿瘤作用。但可提高某些癌细胞对顺铂的敏感性[2]． 1．3方法 1。3。l 如5-Aza．CdR可以逆转卵巢癌对顺铂的耐药性[3]， 组蛋白去乙酰化酶抑制剂(SAHA)可以使人慢性髓养、换液和传代，耐药细胞培养体系中加入终浓 细胞性白血病的耐药细胞株产生化疗增敏作用[4I。 度为1g／mL的顺铂以维持细胞的耐药性，实验 前2周更换为不含DDP的培养基以减少DDP对 目前，我们以耐顺铂(DDP)的人NSCLC细胞 实验的干扰。 A549／DDP为耐药模型，验证5．Aza．CdR和SAHA 1．3．2 M1Tr法取对数生长期的A549／DDP细 是否也可逆转NSCLC的耐药性，其逆转作用是否 resistance 胞，消化后调整细胞密度接种至无菌96孑L板中， gene 与下调多药耐药基因1(multidr