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PrepElite—GVS—LC/MSMS 检测鸡肉中的硝基咪 唑类药物残留 北京莱伯泰科仪器有限公司 应用概述：在样品前处理过程中，往往包括很多步骤，并且步步相连。LabTech 经过多年在样品前处理领域的大力开拓，大力推出有机分析样品前处理整体解决 方案--全自动样品前处理平台，平台由三部分组成（浓缩系统-GPC 凝胶净化系 统-SPE 分离系统），不但能满足单一步骤的实验需求，而且可以实现多个产品 的在线联机，大大简化繁琐的样品前处理流程，降低实验室工作量，提高工作效 率，保证结果的平 行性和准确性，同 时系统的密闭性及 溶剂回收功能，也 可保护操作人员免 受有毒有害物质的 危害。广泛应用于 环境、食品检测、 农产品检测、生命 科学等领域。 硝基咪唑类药 物 (Nitroimidazoles) 是带有硝基的咪唑化合物，其性状为白色或淡黄色结晶，弱碱性，能和酸结合成 盐，遇光易分解，易溶于甲醇，微溶于水，主要用于预防和治疗家禽的滴虫病、 猪的出血性下痢及厌氧菌感染，并具有促生长作用，但是该类药物对哺乳动物具 有致癌、致畸、致突变作用和遗传毒性。常见硝基咪唑类药物包括甲硝唑 (Metronidazole)、氯甲基硝唑 (5-Chloro-1-methyl-4-nitroimidazole)和苯并 咪唑（5-Nitrobenzimidazole)等。这些药物在动物体内通过C2侧链的氧化而被 快速代谢，代谢物与原药具有相似的潜在毒性。因此，欧盟，北美和我国等都禁 止了硝基咪唑在食品动物中的使用。 本文使用PrepElite—GVS全自动样品前处理平台使鸡肉中硝基咪唑类药物 残留检测繁琐的前处理过程自动化，大大简化了人工操作，并且有较理想的结果。 1、实验部分： 1.1 仪器与试剂 PrepElite—GVS: AutoClean 全自动凝胶渗析色谱净化系统，附凝胶色谱柱 Bio-Beads SX3,20 ×300 mm; Sepline 全自动固相萃取系统; LiqVap 全自动定 量浓缩系统 （莱伯泰科有限公司，美国波士顿）； LC-MS/MS 8030 （岛津，日本）； C18 固相萃取柱（LabTech， 1000 mg/6ml）； 硝基咪唑类药物标准品：甲硝唑（纯度≥99.5%），苯并咪唑（纯度≥98%），氯 甲基硝唑（纯度≥97.5%）； 乙酸乙酯（分析纯和色谱纯）,环己烷（分析纯）；氯化钠（分析纯），磷酸氢 二钾 （分析纯），无水硫酸钠（分析纯），甲醇 （色谱纯），所用水均为超纯水。 1.2 标样和样品处理 1.2.1 标准溶液的配置 标准储备液：分别称取10.0 mg标准品，用甲醇溶解并定容于10 ml容量瓶中， 该溶液浓度为1 mg/ml，避光保存于-20℃。 混合标准中间液：分别吸取储备液1 ml于10 ml容量瓶中，用甲醇定容，该 溶液浓度为100 μ g/ml。 混合标准工作液：用流动相比例水：甲醇（85:15）稀释混合标准中间液到 合适的浓度。 1.2.2 样品配置 在超市购买新鲜的鸡胸肉样品切成小块，匀质混匀，制成肉糜。 1.2.3 样品提取方法 称取适量试样，置于50 ml离心管，加适量氯化钠和磷酸氢二钾，并用乙酸 乙酯进行提取，超声10 min，离心，收集上清液；再加入乙酸乙酯重复提取一 次。合并收集液，用无水硫酸钠脱水，过滤纸。氮吹近干滤液，乙酸乙酯：环 己烷（1:1）定容，供GVS净化。 1.2.3 样品净化方法 在PrepElite—GVS全自动样品前处理平台软件上编制硝基咪唑类药物的净 化方法，如下图所示。 图1. 1.2.3提取液进GPC净化 （GPC为2ml定量环，满环进样） 图2 GPC馏分收集液在LiqVap 定量浓缩近干并用甲醇置换 （浓缩至5 ml） 图3. SPE净化 （C18固相萃取柱活化、上样体积4 ml、洗脱体积15 ml、氮气吹干） 图4. SPE上样液和洗脱液液在LiqVap浓缩近干，并用水：甲醇（85:15）置换，过滤膜，进LC-MS/MS检测 1.3 LC-MS/MS 的条件 液相色谱条件：色谱柱：VP-ODS 150 ×2 mm，2 μ m；柱温：35 ℃；流动 相：A-0.1% 甲酸水溶液，B-甲醇；流速0.25 ml/min，等度洗脱程序，A：B （85:15）。 质谱条件：电