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454 1/1/2010 0.99999000000000005 0.99999000000000005 454 2005 2007 2008 2010 2011 0.99999000000000005 0.99999000000000005 Helicos PGM Time/run Roche Helicos Biosciences Ion Torrent 2005 年 2007 年 2008 年 2010 年 Genome Sequencer FLX Titanium ( 2008 年推出) HeliScope? Single Molecule Sequencer ( 2008 年推出) 5 μg of DNA provided at a concentration of ≥ 300 ng/μL ? 10 ng to 5 μg for fragment library ? 10 ng to 5 μg for paired-end library ? 5 μg to 20 μg for mate-paired library 5 μg total DNA required ; DNA sample should be suspended in ≤ 130μL TE 。 半导体芯片测序 微乳液 PCR 单分子检测 PCR 扩增 400bp 2*50 bp 25 to 55 bases in length , 35 average length 0.4-0.6 Gb per run 21 to 35 Gb per run 10 hours 8 days 2 hours Q20 read length of 400 bases (99% at 400 bases and higher for prior bases) 99.995% consensus accuracy at 20X coverage 99.99% consensus accuracy and 99.5% raw accuracy. 无以伦比的快速, 2 个小时完成测序工作; Ion Torrent 的化学测序原理自然简单,无修饰的核苷酸、无激光器或光学检测设备,因而可达到极小的测序偏差和出色的测序覆盖均衡度。 测序通量目前还不够大,增加半导体芯片的容量将有望提高测序仪的处理能力。 分析软件: Bioscope, 比对后格式有很多第三方软件支持 1.Complete Khoisan and Bantu genomes from southern Africa.Schuster SC et al. (2010) Nature 463(7283): 943-7. ( 更多详见 /sis/sequencing/genome/index.jsp) GS De Novo Assembler Software;GS Reference Mapper Software;GS Amplicon Variant Analyzer Software Raw data files can be delivered in srf and/or sms (helicos raw data file) format. The Helisphere open source software is recommended for filtering and aligning raw data. industry standard SFF or FASTQ files. Greater than 99.94% accuracy due to 2-base encoding ; Greater than 99.999% accuracy at 15x coverage. 5 μg of DNA , 浓度≥ 300 ng/μL 1-3 μg ,起始 DNA 体积不超过 100 μL. ? Mate-paired 文库 ( 插入片段 600 bp to 10 Kb) ? Paired-end 文库 ? Fragment 文库 ? Mate-paired libraries (insert sizes from 600 bp to 10 Kb) ? Paired-end libraries ? Fragment libraries Genome Sequencer FLX Titanium(2008) Solid?4.0(2010) HeliScope? Single Molecule Sequencer(2008) 25-55 bp ,平均 35 bp 0.4-0.6 Gb/run 21 to 35 Gb/run 焦磷酸测序 边连接边测序 仪器 $50,000 / 台,测序
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