大肠癌中p53基因突变的研究 A Study on Mutation of p53 Gene in Colorectal Cancer.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing)18(4):26-281996 大肠癌中p53基因突变的研究① 吴国俊，,2李明发1单祥年，余 龙2赵寿元2 (I．南京铁道医学院生物学教研室，南京 210009) (2复旦大学遗传学研究所，上海 200433) 摘 要 应用聚合酶链反应(P（CR）一一单链构型多态性S（SCP)结合银染法对 14例大肠癌p53基因的第 4、第5-6 和第7外显子进行r点突变的研究，结果共检测出6例点突变，而且发现各外显子的突变频 率存在差异。另外，利用购自ATCC的两个探针p（53cDNA探针和pYNZ22探针）对大肠癌中p53基因 的杂合性丢失进行了研究，在 14例大肠癌中共检出6例杂合性丢失．将点突变检测结果同杂合性丢失 结果进行比较分析，并着重探讨了大肠癌中p”基因失活导致肿瘤的作用方式． 关键词 大肠癌，p53基因，单链构型多态性，杂合性丢失 AStudyonMutationofp53GeneinColorectalCancer WuGuojun，2LiMingfaShanXiangnian YuLong2ZhaoShouyuan2 (1.DepartmentofBiology,NanjingRailwayMedicalCollege,Nanjing210009) (2.InstituteofGenetics,FudanUniversity,Shanghai200433) AbstractTheexons4-7ofp53genewereexaminedin14colorectalCancerpatientsbyusingPCR- SSCP-silverstainingmethod.Theresultsshowed6casesofpointmutationandthemutationfrequencies ofexonsweredifferentfromeachother.p53cDNAandpYNZ22VNTRwereusedasprobestoexamine LOH(Lossofheterozygosity)of14colorectalcancers.6caseswithLOHwerefound.Theresultsofpresent researchsuggestthatthemutationandLOH ofp53genearecriticaleventsintheprogressanddevelop- mcntofCancer.Thereweredifferentkindsofinactivationmodelofp53geneintheprocessofdevelop- mentofcancerandtransformationofcells. Keywords Colorectalcancer,p53gene,SSCP,LOH p53基因是目前公认的最为广谱的一种抑癌基因。国内外学者对p53基因与多种肿瘤的相关性，以及基因本 身的结构进行了一系列研究 1-〔4)。本文应用PCR-SSCP结合银染法对人类肿瘤中发病率和死亡率较高的大肠 癌进行了p53基因突变的检测，并同时用购自ATCC的两个探针 p（53cDNA探针，pYNZ22VNTR探针）对 p53基因的杂合性丢失进行了研究。通过对比分析两项研究结果，着重探讨了大肠癌中p53基因失活导致肿瘤发 生的作用方式． 1材 料 与 方 法 1.1基因组DNA的制备 所有标本均由南京铁道医学院附属医院病理科提供并鉴定。大肠癌及癌旁正常组织各 14份，均取自手术切 ①本课题由江苏省 自然科学基金资助． 4期 昊 国俊等：大肠癌 中P53基因突变的研究 27 除标本。立即置-80℃备用。用常规蛋 白酶处理及酚一氯仿提取法提取基因组DNA, 1.2PCR-SSCP结合银染法 在p”基因内设计并合成3对PCR引物，分别位于p53基因的第4、第5-6和第7外显子．长度分别为 317,416和 171bp(中国科学院细胞生物学研究所合成）．引物序列如下： 第4外显子F5-GGAATTCTTTTCACCCATCTACAGTCC;R5-GGAATTCCTCAGGGC AACTGA