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第 26卷第 11期 分析试验室 Vo1．26．No．11
2007年 11月 ChineseJoumalofAnalysisIaboratory 200r7— 11
柱前衍生一高效液相色谱法
测定大熊猫血清中 18种游离氨基酸
赵剑虹 ，杨柳桦 ，李永新 ，吴 鑫 ，毛丽莎，孙成均
(四川大学华西公共卫生学院，成都 610041)
摘 要：建立了大熊猫血清中18种游离氨基酸的反相高效液相色谱分析方法。
血清样品经H_PO3沉淀蛋白后，在弱碱性条件(pH9．0)下游离氨基酸与2，4一二
硝基氯苯在9O℃水浴中避光反应 1．5h，生成具有紫外吸收的衍生物，用反相
c柱分离，紫外检测器检测，内标法定量。18种氨基酸的工作曲线的相关系数
范围为0．9951～0．9999；相对标准偏差为 1．4％～4．7％；检 出限为0．20～7．72
mL；加标回收率为65．9％～1l8％。
关键词：高效液相色谱法；游离氨基酸；2，4一二硝基氯苯；柱前衍生；血清；大
熊猫
中图分类号：0657．7 文献标识码 ：A 文章编号：1000—0720(2007)11-015—05
测定人和动物血清 中的氨基酸，对于了解被 苏氨酸 (Thr)、脯氨酸(Pm)、丙氨酸 (Ala)、缬氨酸
检对象的营养状况和对某些疾病的诊断治疗均有 (Va1)、甲硫氨酸(Met)、胱氨酸 (Cys)、异亮氨酸
一 定参考价值 J。目前，氨基酸的分析方法很多， (Ile)、亮氨酸(Leu)、色氨酸 (Tip)、赖氨酸 (Lys)、
主要有高效液相色谱法2]、氨基酸分析仪法l3J、毛 酪氨酸 (Tyr)，均购 自上海伯奥生物科技有限公
细管电泳法 J、气相色谱一质谱法和液相色谱一质谱 司；苯丙氨酸 (Phe)(北京奥博星生物技术责任有
法 等。本文研究了2，4一二硝基氯苯柱前衍生一 限公司)。分别取上述氨基酸各 0．0500g，用 0．10
高效液相色谱法测定氨基酸的方法，并应用于大 mol／L的HC1溶液定容至 5O．0omL，配制成 1．00
熊猫血清 中18种游离氨基酸的测定。 mg／mL的标准贮备液。再根据血清中各氨基酸存
1 材料与方法 在的浓度水平 ，按表 1配制成氨基酸混合标准贮
1．1 试剂 备液。该氨基酸混合标准贮备液中总氨基酸浓度
乙腈和甲醇均为色谱纯；0．5mol／LNa2CO； 为1．69X1 _／tg／mL。临用前，用纯水稀释成总氨
基酸浓度为 100、200、500和 1000 g／mL的系列标
0．5mol／LNaHCO ；pH9．0的 Na2CO一NaHCO1：用
准应用液。水为 18．2Mr2·cm超纯水。
0．5mol／LNa2CO3加 0．5mol／LNaHCO3调 pH9．O；
1．2 仪器及色谱条件
0．7mol／LnPO3；30g／L2，4一二硝基氯苯 (乙腈溶
HP1100高效液相色谱仪 (AgilentCo，USA)；
解)；30．0mg／L4一氨基丁酸(GABA)；乙酸一乙酸钠 Cl8色谱柱 (Phenomenex，USA)：250rainx4．6rain
缓冲液：称取 1．25g无水 乙酸钠 ，用水溶解后定 i．d．，5tan；保护柱(Phenomenex
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