胞内胞外流式技术的联合应用.pdfVIP

Gene News 基因快讯 年第 期 2007 2 胞内胞外流式技术的联合应用 ——深层的肿瘤研究和药物开发的有效工具 胞内信号通路的失调常常是引起癌变及肿瘤发生的 变化, 因此，当待分析样品为复杂的体系，样品中含 成因，因此，如何有效地检测胞内信号水平变化，分析 有多个细胞亚群或因取材时渗入一些无法避免的杂细 胞内信号水平与各肿瘤特征的关系，寻找有效的药物 胞或组织时，常会由于这些杂细胞干扰或样品中实际 治疗的靶位，是目前众多从事肿瘤研究的专家关注的热 发生变化的细胞亚群数目的稀少而使检测的结果不准 点之一。现在，在已知的胞内信号通路中，最常见的信 确，尤其当样品中各细胞亚群的同一信号分子的调控 号调控分子信号传递的方式为蛋白信号分子的活化与失 不一致时，如某信号分子在一部分细胞亚群被活化， 活，此类信号分子的活性，主要是通过胞内的一些调控 而在另一部份的细胞亚群被失活，检测结果显示该信 因子对信使分子内的一些特定位点进行化学基团的可逆 号分子的总体磷酸化变化水平往往表现为没有变化， 修饰来调节，其中，尤以蛋白的可逆磷酸化最为常见。 这使得一些有效的信号变化为人所忽略。也正由于常 机体内，通过各类蛋白激酶和蛋白磷酸酶启动或抑制信 规检测方法只能检测各信号分子磷酸化总体变化水平 号通路中各关键分子的磷酸化情况，从而改变或控制蛋 的平均值，使得以往进行信号通路分析时，对样本的 白质活性，以达到其特殊的生理功能。因此，胞内信号 要求有一定的局限性，只能对纯的细胞系或相对较纯 通路中各关键分子的磷酸化水平的紊乱常常是反映细胞 的细胞样本进行分析。 病变，监控肿瘤的发生的有效手段。 流式检测技术的出现为科学家们带来了转机，随 过去，科学家们利用常规的胞内磷酸化检测方法， 着抗体生产以及荧光标记技术的发展，应用流式检测 如免疫印迹、免疫共沉、免疫荧光分析等技术，对胞内 技术，通过胞外、胞内流式技术的联合应用，如著名流 信号分子的磷酸化水平的检测有了一定的了解，并取 式抗体供货商-BD Pharmingen提供的胞内磷酸化流式系 得一定的成果，例如在白血病中众多关键的信号分子如 列抗体：BD phosflow相关产品以细胞表面标记分子抗 ERK /ERK2, STAT家族的磷酸化水平与病变的关联性； 体，则可同时对样品中胞外表面分子与胞内分子的磷酸 但是 随着研究的遂渐深入，常规的蛋白磷酸化检验方 化水平进行联合检测，为科学家们进一步了解胞内信号 , 法渐渐已不能满足科学家们的要求，它们只能同时对 分子的磷酸化水平变化提供了新方向。应用胞内流式细 样本中的一个或少数的几种分子进行检测，检测结果 胞检测技术，不单可如前述的传统磷酸化检测技术一 只能反映样品内信号分子的磷酸化平均变化水平等， 样，对样品中的目标信号分子的总磷酸化变情况进行监 都使得科学家们无法更准确的观察胞内的实际信号变 控，还充分体现了流式细胞多参数多指标检测的特点， 化情况，因此，如何同时对不同信号通路进行分析, 在同样一次样本检测中，为研究者们带来更多额外的， 准确反映出整个信号网络的实际总体变化情况成了科 常规检测技术中无法取得的信息。 学家们关注的重点。此外，如上所述，由于常规的检