大肠杆菌不同SOD调控序列红色荧光蛋白报告基因载体的构建及功能鉴定.pdfVIP

第 42卷第 i期 温 州 医 学 院 学 报 VO1．42NO．1 20I2年 1月 JournalofWenzhouMedicalCollege Jan．20l2 潮 大肠杆菌不同SOD调控序列红色荧光蛋白 报告基因载体的构建及功能鉴定 翁丛丛 ，方益 民 ，黄润巧 ，林冬冬 ，张洪勤。，施孟如。 (温州医学院，浙江 温州 325035，1．生物系 ；2．生物学教学中心) [摘 要]目的：通过将大肠杆菌BL21中MnSOD、FeSOD以及Cu／ZnSOD调控序列 (包括启动子，一3518一 +15bp)与红色荧光蛋 白 (RFP)连接，构建成含 SOD调控序列的红色荧光蛋白报告基因，用以研究不同 SOD启动子对RFP的调控作用。方法：采用重组PCR技术，分别构建以MnSOD、FeSOD、Cu／ZnSOD启动子驱 动的RFP报告基因载体，并将构建的融合基因通过T克隆转化入大肠杆菌，通过不同浓度 cd。作用，分别 诱导RFP表达。结果：正确构建 了三种SOD—RFP融合基因，重组PCR结果与测序结果完全一致 ；该报告基 因在室温静息状态下，红色荧光有微弱表达，经cd诱导后，红色荧光亮度明显增强，其中MnSOD调控序 列驱动的RFP表达最为明显。结论：该报告基因载体的成功构建，为研究SOD的基因表达调控机制和研制 检测环境中污染物的微生物传感器提供 了重要基础和工具。 [关键词] 超氧化物歧化酶；调控序列；重组PCR；红色荧光蛋白；基因，报告；大肠杆菌 [中图分类号] Q78 [文献标志码] A [文章编号] 1000—2138(2012)O1—0048—05 Construction and functional identification of red fluorescent protein reporter gene vector driven by different SOD regulatory sequence in E．coli WENG Congcong ．FANG Yimin．HUANG Runqiao．LIN Dongdong．ZHANG Hongqin。Sill Mengru． *Biology Department of WenzhouMedi- cal College， Wenzhou。325035 Objective：Toconstructredfluorescentprotein(RFP)reporter genevectors drivenbydifferentSODregulatorysequenceinF．colithroughfusingMnSOD，FeSOD，Cu／ZnSOD regulatory sequence and RFP gene in BL21F．coli．Methods：Red fluorescent protein (RFP) reportergeneandMnSOD，FeSOD，Cu／ZnSODregulatorysequencewerefusedusingrecombinant PCR technology．And then theSOD·RFP genesconnected withpMD18-T plasmid were transfered into F．col1．The RFP expressed after stimulated by different concentrations Cd respectively． Results：Three SOD—RFP fusion genes were correctly constructed．which were proved by DNA sequencing；the reporter gene expressed a little of red flouresecent protein in the resting state at room temperature，but more red flouresecent intensity was obviously increased after Cd induction