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2012，VOLUMEl3，NO1 ANIMALBIOTECHNOLOGYBULLETlN 羽毛角蛋白分解菌角蛋白酶基因的筛选 陈炫，钟玉宜，朱琳，张爱玲，李加琪’ (广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室 华南农业大学动物科学学院，广州510642) 前言 角蛋白酶在食品、医药、饲料和制革等行业中有着广泛的应用。近年来国内 外一些学者已经克隆出了多个不同来源的角蛋白酶基因，并且进行角蛋白酶的基 因工程研究。本研究拟以一株羽毛分解菌CIK53为出发菌，对其相关角蛋白酶基 因进行筛选研究。 材料与方法 对前期分离到的羽毛角蛋白分解菌CIK53进行培养和抽提基因组DNA后，利 用在线NCBI 克隆，经测序正确后，将PCR片段与P43穿梭载体连接构建表达载体，重组载体转 化大肠杆菌BL2l感受态细胞，对阳性克隆进行筛选与鉴定，并检测筛选的阳性重 组菌株粗酶液的角蛋白酶活性。 结果 三个羽毛角蛋白分解菌胞外蛋白酶基因的克隆PCR克隆HASP、SPE和MEP基 ASP、P43SPE、P43 因与P43表达载体连接构成P43 MEP表达载体，酶切后电泳 检测情况如图1，可以判断出目的片段已经成功与载体片段连接。检测AsP、 SPE、MEP重组菌株与对照菌株BL21消化角蛋白的活性均小于025，说明三个胞 外蛋白酶没有角蛋白酶活性(图2) 圈幽 I I I 目1P43。ASPP43。SPE、P43。MEP《4§#∞m《口女2 目2=十自**自_∞自§自_☆＆∞＆_ 讨论 目前采用基因工程技术将目的基因异源表达和应用微生物工程技术对原产菌 株的改良和选育是利用微生物资源的有效方法。在本研究，从鳄鱼消化道分离出 了CIK53的ASP、SPE、MEP三个胞外蛋白酶，但没有检测到有角蛋白酶的活性。 这可能是由于角蛋白酶基因的表达水平受到多种内部因素如角质蛋白酶基因的结 构等制约，也受到表达系统等外部因素的影响，导致表达水平太低显示无活性， 或者这三个基因虽具有角蛋白酶基因的高相似度序列但并不具有相应的酶活性。 本实验为进一步深入研究CIK53降解羽毛角蛋白能力奠定了基础。 关键词：羽毛角蛋白菌；角蛋白酶；基因：筛选 致谢：本研究由现代农业产业体系专项(CARS36)资助。 +通讯作者：李加琪(1965一)，男，教授，研究方向：动物遗传育种 educn Teh020E-maihjqli@StaLl
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