羽毛角蛋白分解菌生理生化鉴定.pdfVIP

20】2．VOLUMEl3．NO．JANIMALBIOTECHNOLOGYBULLETIN 205 羽毛角蛋白分解菌生理生化鉴定 朱琳，钟玉宜，张爱玲，孙铁成，李加琪’ (广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室，华南农业大学动物科学学院 广州510642) 引言 于自然界中，包括皮肤及其衍生物。角蛋白的化学结构稳定，不溶于水，是一种 难降解、具有极强抗性的硬质蛋白，不溶于水和弱酸弱碱，但角蛋白是自然界中 一种丰富的蛋白资源。前期从鳄鱼的消化液中分离到的一株具有分解羽毛角蛋白 活性的嗜水气蛋白菌(命名为C1K53)，本研究将对其进行各种生理生化指标鉴 定，并绘制其生长曲线。 材料与方法 挑取待检测的CLK53菌种，接种到营养琼脂平板和营养肉汤培养基，培养48tJ, 时，观察菌落形态和液体培养情况。同时进行厌氧生长试验、革兰氏染色试验、 葡萄糖氧化发酵试验等20种生理生化试验。通过比浊法测定光密度值研究嗜水气 单胞苗在LB培养基上生长状态，分别在培养0、1．5、3、4、6、8、10、12、14、 16、20小时将对应试管取出放入4C冰箱中储存，最后一同比浊测定OD570的光密 度值，并绘制其生长曲线。 结果 革兰氏染色结果显示为革兰氏阴性菌(图Ia)，它普遍存在于自然界中，分 为致病性菌株和非致病性菌株，结晶紫染色结果表明单个细菌的形态是具有圆端 的直杆菌，单个或成对排列(图Ib)，极端单生鞭毛，兼性厌氧，不产生芽孢， 5-9．0，最适生长温度为25—35℃。葡萄糖氧化发酵试验结果为开 生长适宜pH为5 管和闭管都是产酸变黄．不产气，有动力，说明其属于运动发酵型。 关于C1K53的生长特性，绘制的生长曲线显示(图2)，C1K53的指数生长期很 短(0—1．5h)，1．5-6h为对数生长期，此后直至20h是稳定生长期，但还未进入 到衰退期。 图2CIK53的生长曲线 讨论 自然界中具有角蛋白酶活性的微生物广泛存在，包括细菌、真菌。但这些被 发现的微生物大部分是从皮毛废弃物总分离纯化到的。本研究根据鳄鱼的经济价 值和生活习性选择其作为试验动物，从鳄鱼肠道消化液中分离到一株角蛋白酶活 性很强的细菌，通过前面的16rDNA扩增比对和生理生化试验证明其是嗜水气单 胞苗，命名为CIK53。嗜水气单胞菌有致病性菌株和非致病性菌株，致病性菌株 被认为是导致人类腹泻的重要病原微生物(陆承平等，1992)，随后被认为是导 致鱼类爆发性疾病的重要病原，也是引起人畜共患病的病原菌，如败血症、皮肤 病和腹泻等，因此鉴定其生理生化特性也为其致病性的研究提供了基础。 关键词：角蛋白分解菌；嗜水气单胞菌；角蛋白酶；生理生化试验 致谢：本研究由现代农业产业体系专项(CARS36)资助。 通讯作者；李加琪(1965一)，男，教授，研究方向：动物遗传育种 educn Tel：020E—mail：jqli@scau