万古霉素修饰磁性纳米粒子的制备及其细菌分离功能.pdfVIP

维普资讯 Vo1．28 高等 学校 化 学 学报 No．1 2007年 1月 CHEMICALJOURNALOFCHINESEUNIVERSITIES 26—28 [研究简报] 万古霉素修饰磁性纳米粒子的制备 及其细菌分离功能 柯诗剑，计 剑 (浙江大学高分子科学与工程系，高分子合成与功能构造教育部重点实验室，310027) 关键词 磁性纳米粒子；万古霉素；生物缔合；细菌分离 中图分类号 O614 文献标识码 A 文章编号 0251-0790(2007)01-0026-03 灵敏即时检测细菌、病毒等病原体对临床医学具有重要的意义，但 目前的检测手段在检测低浓度 的病原体时通常需要长时间的培养和扩增过程，难以达到即时检测的目的．同时复杂样品中其它组分 会干扰或抑制 目标微生物的信号．通过超顺磁性纳米粒子的选择性吸附和预浓缩可以克服上述弊 端¨“]，有效地提高细菌检测的灵敏性和准确性．万古霉素是一种抗生素，它可与革兰氏阳性菌细胞 壁前质末端的D．Ala．D．Ala部分特异性结合 J，Lin等 采用万古霉素修饰磁性微球和质谱联用定量 分析了微量革兰氏阳性菌．赵庆香等 在吸附分离树脂上固定了模拟革兰氏阳性菌细胞壁的多肽类似 物，实现了对万古霉素系列抗菌素的选择性吸附．本文制备了万古霉素修饰的磁性纳米粒子，并研究 了其对金黄色葡萄球菌 (S．fturetta)和大肠杆菌(E．coilBL21)的选择性吸附分离特性． 1 实验部分 1．1 试剂与仪器 氯化铁 (FeCI3·6H2O，A．R．级)；硫酸亚铁 (FeSO ·7H2O，A．R．级)；盐酸 (A．R．级)；氢氧化钠(杭州化学试剂有限公司，A．R．级)；无水乙醇(A．R．级)；盐酸去甲万古霉素 (Van)；．氨丙基．三乙氧基硅烷(APTES)(蒸馏后使用)；N-3．二甲基氨丙基．7、r-乙基碳二亚胺盐酸盐 (EDC)(Sigma-Aldrich公司)；N-羟基琥珀酰亚胺 (NHS)(Aldrich公司)；钕铁硼磁铁 (浙江英洛华磁 业有限公司)；PBS(0．02mol／L，pH=7。4，自配)；金黄色葡萄球 (S。alzretl~)和大肠杆菌 (E．coli BI21)(浙江大学动物科学院动医系)；三蒸水 (自制)． 透射电镜 (JEM-1200EX)；傅里叶变换红外光谱仪(BrukerVectm22)，x射线衍射仪(D／max-rA)； Zeta电位仪(Zetasizer3000HSA)；物理性质测量系统(PPMS)(PPMS-9magnetometer)． 1．2 FeO 磁性纳米粒子(MNP)的制备 采用共沉淀法 制备MNP．在剧烈搅拌下，向除氧的NaOH 水溶液(0．5mol／L)中滴加除氧的0．02mol／LFeC1 ·6H2O，0．O1mol／LFeSO4·7H20和0．4mol／L HC1的混合液，同时通氩气并超声分散，滴加完后，继续搅拌30min．反应结束后，用磁铁分离出黑色 沉淀，用三蒸水洗涤3次，用0．O1mol／LHC1洗涤 1次，分散在三蒸水中． 1．3 FeO磁性纳米粒子的表面氨基化(MNP．A陇 s) 参照文献[8]方法，用硅烷偶联剂APTES对 MNP进行表面氨基化+取Fe，O纳米粒子50mg，用无水乙醇洗涤3次，然后分散在50mL无水乙醇 中，向其中加入 1mLAPTES及0．5mL三蒸水，超声分散5min，于6o℃振荡反应20h．停止反应后， 分离出粒子，分别用无水乙醇和三蒸水洗涤3次，分散在三蒸水中． 1．4 Fe，O 磁性纳米粒子的表面万古霉素修饰(MNP-APTES．Van) 取氨基化后的Fe3O 磁性纳米粒 子约45mg，分散在pH=5．0(用盐酸调节)的三蒸水中，向其中加入45mg盐酸去甲万古霉素、30mg 收稿 日期：2o06 7 ． 基金项 目：教育部霍英东基金优选资助项 目(批准号：资助． 联系人简介：计 剑(1969年出生)，男，博士，教授，主要从事生物医用高分子、介入医用材料和组织工程材料的研究 E，mail：jia~i@mail．hz．zj．cn