重组腺病毒Ad5F35-IL-12感染不同单核-巨噬细胞的研究.pdfVIP

ChinJCellMolImmuno1)2013．29f2 113 · 论著 · 文章编号：1007—8738(2013)02—0113—05 重组腺病毒Ad5F35-一II,·12感染不同单核．巨噬细胞的研究 王 秦，成 风，张维理，匡文斌，李 朴，董晋豫，梁勤东，涂植光 (重庆医科大学检验医学院，临床检验诊断学教育部重点试验室，重庆 400016) [摘 要] 目的 确定人 IL-12基因重组腺病毒Ad5F35一IL-12在-~N． L单核．巨噬细胞中的表达。方法 将人IL．12基因重组腺 病毒Ad5F35-IL一12分别感染人外周血单个核细胞、胸水巨噬细胞，以及mP．1和U937单核细胞株及其经佛波酯(PMA)诱导后 生成的巨噬细胞 ；感染48h后荧光显微镜观察对相应细胞的感染效率，RT．PCR检测IL．12双亚基p35和p40的mRNA表达情 况，ELISA检测细胞培养上清中IL一12p70的分泌水平。结果 人IL一12基因重组腺病毒Ad5F35．IL一12可成功感染人外周血单个 核细胞、胸水巨噬细胞以及 THP-1和U937单核细胞株及其PMA诱导后生成的巨噬细胞，并分泌 IL．12p70蛋白，蛋白表达量 从高至低依次是胸水巨噬细胞、PMA诱导后 U937细胞、PMA诱导后THP．1细胞、U937细胞、外周血单个核细胞、THP．1细 胞。结论 人 IL-12基因重组腺病毒Ad5F35一IL-12可以感染不同的单核．巨噬细胞，并成功表达分泌IL．12p70蛋白。 [关键词】IL-12；腺病毒Ad5F35；单核巨噬细胞 ；基因治疗 [中图分类号]R392．33，R392．12 [文献标志码]A Infection ofrecombinantadenovirusAd5F35．几 ．12 in differentkindsofhuman mononuclearmacrophages WANGQin，CHENG Feng，ZHANG Weili，KUANG Wenbin，LIPu，DONG Jinyu，LIANG Qindong，TU Zhiguang CollegeofLaboratoryMedicine，MinistryofEducationKeyLaboratoryofLaboratory MedicalDiagnostics，ChongqingMedicalUniversity， Chongqing400016，China lAbstractJ oHective Toinvestigatetheefficienciesoftransfectionandexpressionofhumanrecombinantadenovirus Ad5F35-IL-12inthedifferentkindsofhumanmononuclearmacrophages．Methods Thehumanrecombinantadenovirus AdSF35-IL一12wasusedto infecthumanperipheralbloodmonocytes，pleuralfluidmacrophagesaswellasTHP-1，U937 monocytecelllinesandtheirphorbolmyristateacetate (PMA)·inducedmacrophages．48hlater，greenfluorescencewas observedunderthefluorescencemicroscopetodetectthetransfectionefficiency．TheexpressionsofIL·12double-subunits (p35，p4o)mRNAweretestedbyRT-PCRandthelevelofIL-12p70proteininthecellculturesupernatantwasdetectedwith ELISA．Results ThehumanrecombinantadenovirusAd5F35-IL-12successfullyinfectedthehumanperipheralbloodmono- cytes，pleuralfluidmacrophages，THP-1monocytes，U937monocytes，andTHP