植物组织rna 提取的难点及策略.pdfVIP

生物技术通报990108 生物技术通报 BIOTECHNOLOGY INFORMATION 1999年 第1期 No.1 1999 植物组织RNA提取的难点及对策 李宏1,2　王新力1 摘　要：　 酚类化合物、多糖、蛋白质和未知次级代谢产物是影响植物组织RNA提取 的几个主要干扰因素。本文对它们在植物RNA提取过程中的干扰作用、现象以及消除 它们的一些方法进行了综述。 关键词：　RNA提取；植物组织；影响因素 The Difficulties in the Isolation of RNA from Plant Tissues and their Resolving Strategies Li Hong1,2 　Wang Xinli1 1 Laboratory of Plant Biotechnology, Institute of Micobiology, Chinese Academy of Sciences, Bejing, 100080； 2 Department of Light Industry, Hebei Sciences and Technology University, Shijiazhuang, 050018 Abstract:　Phenolic compounds, polysacchrides, proteins and unidentified secondary metabolites are four main factors interfering the isolation of RNA from plant tissues. We described here that their interference, phenomena and methods for eliminating them. Key words:　RNA extraction ； plant tissues ； interfering factors 　　 　　从植物组织中提取RNA是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。要进行 Northern杂交分析，纯化mRNA 以用于体外翻译或建立cDNA文库，RT-PCR及差示分析 等分子生物学研究，都需要高质量的RNA 。因此，从植物组织中提取纯度高、完整性 好的RNA是顺利进行上述研究的关键所在。 　　从文献报道上看，有许多植物就是由于未能有效地分离纯化其组织中的RNA ， 而 阻碍了其分子生物学方面研究的进展。一般认为在这些植物组织中，或富含酚类化合 物，或富含多糖，或含有某些尚无法确定的次级代谢产物，或RNase 的活性较高。在 完整的细胞内这些物质在空间上与核酸是分离的，但当组织被研磨，细胞破碎后，这 些物质就会与RNA相互作用。酚类化合物被氧化后会与RNA不可逆地结合，导致RNA 1 2 活性丧失及在用苯酚、氯仿抽提时RNA 的丢失 ［］，或形成不溶性复合物 ［］；而多 3 糖会形成难溶的胶状物，与RNA共沉淀下来 ［］；萜类化合物和RNase会分别造成 万方数据 file:///E|/qk/swjstb/swjs99/swjs9901/990108.htm（第 1／6 页）2010-3-23 7:44:49 生物技术通报990108 2 RNA 的化学降解 ［］和酶解。对于这些植物材料，用常规的RNA提取方法（如胍法、 苯酚法和十六烷基三甲基溴化胺法等）难以提取出其RNA 。如L бp