巨细胞病毒增强子提高人甲胎蛋白启动子效率的研究.pdfVIP

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2013, 35(4): 486–493 巨细胞病毒增强子提高人甲胎蛋白启动子效率的研究 1 2 3 1 1 1 叶景佳 陈 萍 贾振宇 * 李春春 陈丽红 曹 江 * 1 2 ( 浙江大学医学院附属第二医院临床研究中心, 杭州 310009; 浙江大学医学院附属邵逸夫医院中心实验室, 杭州 310016; 3浙江省医学科学院, 杭州 310013) 摘要 人巨细胞病毒(CMV)早期转录增强子能够提高其他基因启动子的转录启动效率。 CMV早期转录增强子对人甲胎蛋白(AFP)启动子的转录增强的作用及特异性的影响, 将决定其是 否适用于肝癌靶向性基因治疗。作者利用PCR法分别克隆了人AFP增强子、启动子和CMV早期 转录增强子, 构建了相应的pGL4.10 荧光素酶报告基因载体, 与内参照pGL4.74质粒共转染人肝癌 细胞Hep3B 、HepG2 、SMMC7721和人宫颈癌细胞HeLa 、乳腺癌细胞Bcap37, 利用双荧光素酶检 测系统检测分析了这些细胞中AFP增强子— 启动子的效率。结果表明, CMV早期转录增强子能够 明显增强AFP增强子— 启动子在肝癌细胞中的效率(在Hep3B 、HepG2和SMMC7721细胞中分别提 高33.07、134.22和465.18倍), 但是也能提高AFP增强子— 启动子在非肝癌细胞中的效率(在HeLa和 Bcap37 细胞中分别提高335.73和1096.81倍) 。因此, CMV增强子虽然可以大大提高AFP增强子— 启 动子的效率, 但无特异性, 直接将其用于靶向AFP 的肝癌基因治疗时可能会产生由于治疗基因在正 常组织中的非特异表达而引起的副作用。 关键词 细胞特异性启动子; 甲胎蛋白; 巨病毒早期转录增强子; 基因治疗 Improvement of Human AFP Promoter Efficiency by CMV Early Enhancer 1 2 3*, Li Chunchun1 1 1* Ye Jingjia , Chen Ping , Jia Zhenyu , Chen Lihong , Cao Jiang 1 ( Clinical Research Center, The 2nd Affiliated Hospital, Zhejiang University School of Medicine, Hangzhou 310009, China; 2Institute of Clinical Research, Sir Run Run Shaw Hospital, Zhejiang University School of Medicine, Hangzhou 310016, China ; 3Zhejiang Academy of Medical Sciences, Hangzhou 310013, China) Abstract CMV early enhancer can be used to improve the efficiency of promoters of other genes. The impact of CMV early enhancer on the efficiency and specificity of AFP