毕业论文-CUC3基因RNA干扰载体对烟草的转化及鉴定.docVIP

毕业论文（设计） 题目： 院 （系） 化学与环境工程学院 专 业 生物工程 学生姓名 成 绩 指导教师 （职称） 教 授（职称2008年6月 诚信声明 本人郑重声明：所呈交的毕业设计（论文）是我个人在导师指导下, 由我本人独立完成。有关观点、方法、数据和文献等的引用已在文中指出,并与参考文献相对应。据我查证，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表和撰写的研究成果，也不包含为获得其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。 我承诺，论文中的所有内容均真实、可信。如在文中涉及到抄袭或剽窃行为，本人愿承担由此而造成的一切后果及责任。 毕业论文（设计）作者签名： 签名日期： 年 月 日 摘 要 采用叶盘法通过导入了构建好的表达载体根癌农杆菌，对野生型烟草叶片进行转化。烟草叶片在分化培养基MS + 0.1mg/L NAA + 1.0mg/L 6-BA + 50mg/L Hyg + 500mg/L Cb上4周后分化出芽；在生根培养基MS +0.2 mg/L IBA +0mg/L Cb上，2周后形成根；叶片β-葡萄糖甘酸酶GUS）组织化学染色，阳性率为75%；通过PCR 检测潮霉素磷酸转移酶（HPT）基因的DNA序列，获得14个阳性株系。在烟草转化阳性株系中获得了2种表型：叶片融合和叶片缺失。 关键词∶根癌农杆菌；GUS组织化学染色; 聚合酶链式反应( PCR) Abstract Agrobacterium with expression vector transformed the leaves of Nicotiana tabacum. Regenerated shoots were formed in 4 weeks when the leaves of N. tabacum cultured on shoot-inducing medium MS medium supplemented with 0.1mg/L NAA, 1.0mg/L 6-BA, 50mg/L Hyg and 500mg/L Cb. Shoots rooted on the root induction medium MS medium supplemented with 0.2mg/L IBA and 250mg/L Cb in 1-2 weeks. β-glucuronidase(GUS) histochemical assay indicated that the GUS positive rate was 75%. PCR analysis of gene Hygromycin phosphotransferase(HPT) gene indicated that there were 14 positive lines. There were 2 distinct phenotypes in the positive lines: leaf fusion and leaf incompleteness. Keywords：Agrobacterium tumefacien; GUS staining; polymerase chain reaction (PCR) 第一章 前言 1 1.1 烟草概述 1 1.1.1 烟草的生物学研究 1 1.1.2 烟草的遗传转化研究进展 1 1.2根癌农杆菌转化体系 2 1.2.1根癌农杆菌介导的分子机制 3 1.2.2 用根癌农杆菌进行基因转化的植物 3 1.3 RNA干扰 4 1.3.1 RNA干扰的定义 4 1.3.2 siRNA基因沉默原理 4 1.3.3 RNA干扰在植物中的应用 4 1.3.4 CUC3（Cup-Shaped Cotyledon3）基因 6 1.4 常用分子生物学实验方法 6 1.4.1 GUS基因检测——组织化学染色法 6 1.4.2 基因组DNA提取（CTAB法） 7 1.4.4 PCR技术 8 1.4.4 琼脂糖凝胶电泳 8 1.5立题的依据及目的 10 1.6本研究的目的及实验内容 11 第二章 材料与方法 12 2.1材料 12 2.1.1植物材料 12 2.1.2菌株 12 2.1.3培养基 12 2.1.4试剂 13 2.1.5实验仪器 14 2.2 方法 16 2.2.1烟草无菌苗的培养 16 2.2.2菌株及培养 16 2.2.3叶盘法浸泡转化及植株再生 17 2.2.