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医学细胞生物学实验 第一次实验 Ⅰ 细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示 Ⅱ 细胞内DNA和RNA的原位显示 Ⅲ 线粒体的观察 Ⅰ 细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示 [实验目的] 1、掌握酸、碱性蛋白在细胞内的分布情况； 2、了解酸、碱性蛋白显色反应的一般原理和方法。 [实验原理] 由于不同蛋白质分子所带酸性基团和碱性基团数量不同，生理条件下，整个蛋白质带负电荷多则为酸性蛋白，带正电荷多则为碱性蛋白。可用不同pH值的固绿染色，即可显示细胞内酸性蛋白或碱性蛋白。 三氯醋酸可抽提掉核酸，避免影响实验结果 [注意事项] 1、处死蟾蜍的过程要注意安全； 2、血涂片制作不宜过厚，切勿反复推片； 3、三氯醋酸要冲洗彻底。 1、掌握DNA和RNA在细胞内的分布情况； 2、了解DNA和RNA显色反应的一般原理和方法。 [实验原理] 　　　甲基绿和派洛宁是互不混淆、互不影响的两种染色剂，由于其自身分子结构的特点，它们可与两种聚合程度不同的核酸竞争性结合，从而同时显示细胞内DNA和RNA的分布部位。 [注意事项] 禁止用三氯醋酸处理 每人制三张血涂片 Ⅲ 线粒体的观察 线粒体（mitochondrion） 活体染色（vital stainning） [实验目的] 了解线粒体的活体染色方法。 [实验原理] 线粒体上的细胞色素氧化酶系可保持詹纳斯绿B染料始终处于氧化状态而呈绿色，因此詹纳斯绿B可专一性地对线粒体进行活体染色。 [注意事项] 1、取材部位及力度 2、盖片的技巧 3、染液干后的处理 内容安排 一、实验操作： 完成三个实验内容 两人一组，每人一套器械（弯盘、镊子） 8人一只蟾蜍 二、示教 三、完成作业： 1、通过本次实验学到了哪些基本操作技能？ 2、结合本次实验请阐述细胞化学技术的原理和应用？ 3、请描述本次实验的镜检结果。 教 师：李学英、杨明理 联系方式：8609692 实验课要求 预习 穿白大衣并扣好 认真操作 爱护仪器 保持卫生 保持安静 实验完成后： 1、将动物尸体扔到门口动物垃圾桶中；集中 送到动物中心焚烧； 2、清洗并检查自己桌面上的器材（弯盘、镊 子等）； 3、做好显微镜使用登记，盖好防尘罩； 4、将用过的载玻片刷洗干净后放入回收盆中; 5、盖玻片、吸水纸等扔到垃圾桶中。 本学期实验进度安排 细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示 细胞内DNA和RNA的原位显示 线粒体的观察 细胞膜的通透性观察 小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察 细胞内过氧化物酶的原位显示 细胞有丝分裂的观察 设计型实验报告指导 动物细胞融合 细胞核的分离与鉴定 小白鼠骨髓细胞染色体标本的制备 第一次 (验证型) 第二次 (验证型) 第三次 (验证型) 第四次 (设计型) 第五次 （设计型） 第六次 (验证型) P28 P28 P23 P42 P46 P28 P56 P34 P38 P78 显示细胞内化学组分和细胞器应选用什么技术 细胞化学法(cytochemical methods)　　 在保持细胞结构的基础上，利用某些化学物质与细胞内某种成分发生化学反应，在局部范围形成有色沉淀的原理，对细胞的化学成分进行定性、定位和定量的研究。 细胞结构 化学反应 有色 沉淀 定性、定位和定 量 [操作流程] 制血涂片 晾干 5min 95%乙醇 固定 晾干 90℃三氯醋酸 20min 抽提 流水冲洗 晾干 染色 冲洗、晾干 镜检 蟾蜍 双毁髓法 处死 20min 0.1%碱性固绿 心脏血 5min 0.1%酸性固绿 染色 冲洗、晾干 镜检 Ⅱ 细胞内DNA和RNA的原位显示 [实验目的] [操作流程] 制血涂片 晾干 10min 95%乙醇 固定 晾干 甲基绿-派洛宁液 15min 染色 冲洗、晾干 镜检 蟾蜍 双毁髓法 处死 心脏血 显示活细胞内细胞组分、细胞器应采用什么方法？ 活体染色：应用无毒或毒性较小的染色剂显示活细胞内某些天然结构存在的真实性，同时对细胞生命活动影响较小的一种染色方法。 无毒或毒性较小 天然结构 影响较小 　　 [实验步骤] 口腔粘膜 上皮细胞 盖片、镜检 取清洁载玻片 詹纳斯绿B液 1-2滴 染 色 20min