恶性疟原虫MSP1蛋白C-末端19kD蛋白在家蚕杆状病毒表面展示系统中的表达研究.docVIP

 恶性疟原虫 MSP1 蛋白 C-末端 19kD 蛋白在 家蚕杆状病毒表面展示系统中的表达研究# 吴昕昕1,2，申俊1,2，陈剑清1,2，张耀洲1,2** 5 10 15 20 25 30 35 40 （1. 浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所，杭州 310018； 2. 天津市国际生物医药联合研究院，天津 300457） 摘要：恶性疟原虫裂殖子表面蛋白 1（MSP1）是目前疟疾疫苗研制的热点之一。由其水解产 生的 C-末端 19kD（MSP119c）片段在裂殖子进入人红细胞后依然存在于裂殖子表面，研究表 明可诱导机体 T 细胞和 B 细胞产生免疫应答，因此是重要的候选抗原位点之一。本研究的方 法是将 MSP119c 的基因片段连接到本实验室构建的展示载体 pFastBac-gp64 中,gp64 基因 中含信号肽序列和跨膜序列,成功构建了真核供体质粒 pFastBac-gp64-MSP119c。该质粒 转 化 大 肠 杆 菌 DH10Bac 感 受 态 细 胞 后 与 家 蚕 杆 状 病 毒 基 因 组 发 生 转 座 得 到 Bacmid-gp64-MSP119c，通过脂质体介导法转染家蚕 BmN 细胞，在细胞内经过装配形成重组 杆状病毒 BmNPV-gp64-MSP119c 并复制扩增。用第三代 BmNPV-gp64-MSP119c 病毒以中等感染 复数接种家蚕蛹，7 天后收集发病蚕蛹。Western Blotting 及双向电泳检测表明重组杆状病 毒在蚕蛹中表达了 MSP119c 蛋白，证明重组杆状病毒 BmNPV-gp64-MSP119c 重组成功。纯化 重组病毒粒子免疫新西兰雄兔制备抗体，抗体经 ProteinA 抗体纯化柱纯化后，通过 ELISA 检 测发现抗体效价达到 1:8000 以上，表明该重组的病毒能有效刺激机体产生抗体。本研究成 功将恶性疟原虫 MSP119c 蛋白展示在家蚕杆状病毒表面，为一种全新的疟疾疫苗的制备打下 了基础。 关键词：恶性疟原虫 MSP1 蛋白；家蚕杆状病毒表面展示技术；重组杆状病毒 BmNPV-gp64- MSP119c 中图分类号：Q78 Baculovirus/Silkworm Surface Display of Plasmodium Falclparum Merozoite Protein (C-Terminal 19 kD) and Expression Research WU Xinxin1,2, SHEN Jun1,2, CHEN Jianqing1,2, ZHANG Yaozhou1,2 (1. Institute of Biochemistry, Zhejiang Sci-tech University, HangZhou 310018; 2. Tianjin International Joint Academy of Biotechnology and Medicine, TianJin 300457) Abstract: Plasmodium falciparum merozoite surface protein1(MSP1) is one of the most important antigens in Malaria vaccine research.Produced by hydrolysis of the c-Terminal 19kD (MSP119c) fragment is still exist in the merozoite surface after the merozoite enters human red blood cells.research suggests that T-cells and B-cells can be induced by the organism immune response,so it becomes the important candidate antigen locus.In this paper we connect the MSP119c genes to a show caeeier of pFastBac I-gp64,which is built in our laboratory,gp64 genes containing signal peptide sequence and gene of transmembrane sequence.We uccessfully built the eukaryotic for physical size pFastBac I-gp64-MSP119c.Using this recombinant plasmid trans