蚕素Bombyxin A-4在家蚕杆状病毒表达系统中的表达与功能研究.docVIP

 蚕素 Bombyxin A-4 在家蚕杆状病毒表达系 统中的表达与功能研究# 丁贤谋1,2，陈剑清1，舒特俊1，张耀洲1,2** 5 10 15 20 25 30 35 40 （1. 浙江理工大学生命科学学院，杭州 310018； 2. 天津国际生物医药联合研究院，天津 300457） 摘要：蚕素是家蚕体内一种 5 kD 大小的小肽，同人的胰岛素具有 40%左右的序列同源性， 被确定为胰岛素家族的一种。本研究首先根据蚕素原 BombyxinA-4 的 ORF 序列，以重叠延 伸 PCR(SOE-PCR)技术体外延伸获得 B 链和 A 链重组的目的基因 BA，构建原核表达质粒 pGEX4T-1-BA，转化大肠杆菌 E.coli Rosetta-gami(DE3)pLysS 表达融合蛋白，纯化后免疫新 西兰雄兔获得检测抗体。再从家蚕组织 cDNA 文库中扩增获得蚕素 BombyxinA-4 的 ORF 序 列，利用 Bac-to-Bac 系统，将目的基因重组至 Bacmid 上，转染家蚕 BmN 细胞，获得重组 病毒 vBmBombyxinA-4，再将该重组病毒接种于家蚕蛹，待大部分家蚕蛹出现明显病毒感染 症状后，收集并进行 Western blotting 检测。结果表明蚕素 BombyxinA-4 在家蚕蛹中得到表 达，该表达产物能够促进家蚕卵巢细胞 BmN 的生长，同时将正常的家蚕蛹和感染重组病毒 的家蚕蛹分别治成粉剂，在高血糖小鼠模型上进行了降血糖作用的研究，结果发现感染重组 病毒的家蚕蛹比正常家蚕蛹的降血糖作用明显，为开发新的降血糖类的药品和保健品奠定了 基础。 关键词：分子生物学；BombyxinA-4；Bac-to-Bac 系统；家蚕 中图分类号：Q78 Expression of BombyxinA-4 in Bombyx mori Baculovirus Expression System and Study of its Function Ding Xianmou1,2, Chen Jianqing1, Shu Tejun1, Zhang Yaozhou1,2 (1. College of Life Science,Zhejiang Sci-Tech University, HangZhou 310018; 2. TJAB, TianJin 300457) Abstract: Bombyxin is a 5 kDa brain peptide of the silkmoth Bonbyx nori, whose amino acid sequences have 40% identity with human insulin , belonging to the insulin peptide family. In this study, the target BA gene recombianted with B Chain and A Chain was obtained by SOE-PCR according to BombyxinA-4 ORF. The target BA gene was cloned into pGEX4T-1 to constuct expression vector pGEX4T-1-BA, then recombiant protein was expressed in E.coli Rosetta-gami(DE3)pLysS and purified, the purified protein immunize male New Zealand rabbit and the obtained antibody was used for detection. Then a Bombyxin protein gene (BombyxinA-4) sequence was obtained from silkworm cDNA library constructed by our laboratory. The target gene was recombined to Bacmid by Bac-to-Bac baculovirus expression system, transfected into BmN cells to generate recombinant baculovirus vBmBombyxinA-4. Then the silkworm pupae was infected with vBmBombyxinA-4. Results of Western blotting showed that the BombyxinA-4 could