甘蔗丝氨酸_苏氨酸激酶基因的克隆及序列分析.docVIP

 甘蔗丝氨酸/苏氨酸激酶基因的克隆及序列 分析# 陈玲1,2,3，叶冰莹1,2,3，黄贞杰1,2,3，张积森1,2,3，陈由强1,2,3，陈如凯2** 5 10 15 20 25 30 35 40 （1. 福建师范大学生命科学学院，福州 350108； 2. 农业部福建甘蔗生物学与遗传育种重点实验室，福州 350108； 3. 福建省发育与神经生物学重点实验室，福州 350108） 摘要：本研究以福农 28 甘蔗品种为实验材料，电子克隆设计引物，克隆得到了甘蔗 STK 基 因的 cDNA 片段。采用 RACE 技术克隆获得到了甘蔗叶 STK 基因 cDNA 的 5及 3端序列，长度 分别为 750bp 和 1000bp。5，3端序列与中间片段重叠延伸后总片段长为 1364bp，其中 5UTR 为 54bp，3UTR 为 485bp，包含完整的 0RF 为 825bp，共编码 274 个氨基酸。Open Reading Frame Finder 确定其为丝氨酸/苏氨酸激酶，通过预测(cn．expasy．org/too1s)该蛋白质分子 质量为 29.9052 ku，理论等电点为 6.36。将其基因序列与 NCBI 中其它植物的 STK 进行比对， 与高粱、玉米、水稻、短柄草、大麦的相似性分别为 97%，94%，89%，89%，88%。 关键词：STK；基因克隆；电子克隆 ；RACE；序列分析 中图分类号：Q946 Molecular Cloning and Sequence Analysis of STK from Saccharum officinarum CHEN Ling1,2,3, YE Bingying1,2,3, HUANG Zhenjie1,2,3, ZHANG Jisen1,2,3, CHEN Youqiang1,2,3, CHEN Rukai2 (1. College of Life Sciences,Fujian Normal University, FuZhou 350108; 2. Key Lab of Fujian Sugarcane Biology and Genetic Breeding,Ministry of Agriculture, FuZhou 350108; 3. Fujian Key Laboratory of Developmental and Neuro Biology, FuZhou 350108) Abstract: A cDNA encoding STK was isolated from the leaf of saccharum officinarum FN28 with silicon cloning designing primers，5 and 3 untranslated regions got by using RACE was 750bp and 1000bp respectively.The total sequence consists of 1364 bp after overlapping and extending the sequences of 5,3and middle segment，have 5UTR of 54 bp, 3UTR of 485bp and an open reading frame 0f 825 bp that encodes the protein of 274 amino acids. Open Reading Frame Finder determine it for serine/threonine kinase,the molecular weight is 29.9052 ku and theoretical pI is 6.36 by forecasting(∥cn.．expasy．org/too1s).Compare the STK gene sequence with other plants of NCBI,the similarity of Sorghum bicolor, Zea mays, Oryza sativa, Brachypodium distachyon, Hordeum vulgare is 97%，94%，89%，89%，88% respectively. Keywords: STK; gene cloning; silicon cloning; RACE; sequence ana1ysis 0 引言 甘蔗的主要产物是蔗糖，积累于茎节间。专门制造厂萃取与纯化的蔗糖，用于人类食品 产业的原料，或者发酵生产一种低污染染料——乙醇[1]，因此，研究与糖代谢相关的信号通 路具有重要