颅脑疾病重点实验室开放课题项目申请书化脓性脑膜脑炎脑脊液细菌 16S rRNA 检测和功能分析.docVIP

编号： 宁夏颅脑疾病重点实验室 ——省部共建国家级重点实验室培育基地 开放课题申请书 项目名称：化脓性脑膜脑炎脑脊液细菌16S rRNA 检测重点项目□面上项目 申请经费：10万元 项目负责人：王振海 所属部门：宁夏医科大学医院神经内Email 地址：wangzhenhai1968@163.com 项目起止时间：2011年月年月 填 写 说 明 一、填写本《申请书》前，请先查阅《宁夏回族自治区颅脑疾病重点实验室——省部共建国家重点实验室培育基地开放课题申请指南》（以下简称《指南》）。申请书所列内容必须实事求是，逐项认真填写，表达要明确严谨。 二、申请书一式三份，A4纸打印，左侧装定，连同电子版按通知要求如期递交实验室办公室，逾期不予受理。 三、研究项目名称要确切反映研究项目的内容，字数最多不超过26个汉字。 四、申请书中有关栏目（简表除外）填写不下时可另加附页。 五、项目研究时间为2年，资助额度参见《指南》。从申请当年5月1日起执行。一、基本信息 项目基本信息 项 目 名 称 化脓性脑膜脑炎脑脊液细菌16S rRNA检测宁夏医科大学医院中枢神经系统感染和脑脊液细胞学研究中枢神经系统Borna病病毒感染的基础研 2007年国家自然科学地区基金课题中枢神经系统新发病毒感染脑脊液分子生物学诊断建立和分子流行病学研究编号：2006AA02Z196“863”研究计划专题课题中枢神经系统Borna病病毒感染的脑脊液细胞CT技术诊断平台建立研究（编号：20070420721）2007年第42批中国博士后科学基金项目）（一）研究目的、意义及国内外研究现状 1研究目意义 化脓性脑膜脑炎，系由各种细菌感染引起的脑膜炎症，在发达国家成人年发病率为4／10万～6／10万[1]。主要临床表现为发热、颈项强直、意识改变和惊厥，其发生率分别为96％、55％、94％和12％[2,3]。自使用抗生素以来其病死率已由50％～90％降至10％以下，但仍是严重感染性疾病之一。目前，许多发展中国家由于疫苗尚未得到推广，化脓性脑膜脑炎的病死率仍高达10%-30%[4-6]，一些非洲国家的农村儿童急性化脓性脑膜脑炎的总病死率更是高达35%-36%[7,8]，幸存者中有30%-50%发生永久性神经系统后遗症[4,6,9]。 CSF检查和培养是诊断化脓性脑膜脑炎的必须手段，其中能检测到的细菌可达数十种，但由于面临着抗生素的早期使用、菌种变迁、混合感染等问题，导致CSF细菌培养结果常常呈假阴性。用PCR方法能诊断出多种病原菌，敏感性和特异性均明显高于CSF培养法，可为化脓性脑膜脑炎的病原学诊断提供更为可靠的依据。但这种方法所提供的信息量有限，且其研究目标通常是测定目前已知的单一细菌的基因组序列。近年来，宏基因组学（metagenomics）的提出为解决这一问题提供了可行途径，它是研究直接从环境样本，如人类胃肠道、口腔等中直接提取基因组遗传物质并进行相关分析的学科。传统的微生物研究依赖于实验室培养，而宏基因组避开了传统研究方法中微生物培养这一步，扩展了微生物资源的利用空间，它的兴起填补了无法在传统实验室中培养的微生物研究的空白。 本课题拟选择1例典型急性化脓性脑膜脑炎患者在入院、治疗10天、20天、30天时的CSF，将不同阶段的样品进行比较，获得细菌与人疾病等特性的联系，全面提升对于化脓性脑膜脑炎患者CSF中的菌群之间密切关联认识的总体水平，进一步揭秘人体与细菌之间的关系，有效地指导人类对疾病的认识，确定在该领域的核心地位和国际竞争力。 2国内外研究现状及发展动态分析 2.1 化脓性脑膜脑炎的诊断 2.1.1 CSF的细菌培养和药敏试验 CSF的细菌培养和药敏试验是临床医师诊断和治疗化脓性脑膜脑炎，合理选用抗生素，提高疗效，避免抗生素滥用的重要依据，但其耗时较长(通常为3～4d)；由于CSF细菌培养所需菌量较多，细菌培养只能检测活细菌，标本采集和送检过程中难以保证细菌存活，且临床应用抗生素者细菌生长受抑，故临床上CSF培养阳性率较低，而且确诊前常因有不正规的抗生素治疗使CSF改变更不典型等，如脑膜炎双球菌脑膜炎应用抗生素2h，肺炎链球菌脑膜炎应用抗生素4d，CSF培养细菌即为阴性[10]，给早期诊治带来一定的困难，难以适应临床早期诊断。 CSF 16S rRNA基因检测 16S rRNA基因是细菌染色体上编码rRNA相对应的DNA序列，存在于所有细菌及衣原体、支原体、螺旋体等原核生物的染色体基因中，不存在于病毒、真菌等非原核生物体内。16S rRNA基因有高度保守性，长度适中，多信息、多拷贝，在通用保守区设计引物，可用于对病原微生物感染的检测。理论上可以设计不同的引物对所有细菌或特定细菌进行PCR检测。细菌16