单染色--课件.pptVIP

微生物学实验教学安排 一、课程简介：必修课，36学时、1个学分 二、实验考核方式：见实验讲义P3 三、实验项目及学时 课堂纪律 严格遵守实验室规章制度 严肃课堂纪律 不允许无故旷课、早退（1次） 迟到（3次） 实验室安全和卫生 安全 实验室严禁吸烟。 注意用水、防电和防火 正确使用化学试剂和仪器 所有带菌材料均要严格按实验讲义规定进行无害化处理 实验一 Ⅰ环境微生物的检测和菌落观察；Ⅱ显微镜油镜的使用、细菌形态结构的观察  实验目的 实验原理 实验材料 实验步骤 实验报告 问题与讨论 一、实验目的 1、学习并掌握普通光学显微镜的构造和油镜的使用技术及维护的基本知识； 2、学习微生物涂片、单染色的基本技术；初步认识细菌的形态特征； 3、 证明实验室环境与体表存在微生物； 4、 比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型； 5、 观察不同类群微生物的菌落形态特征； 6、 体会无菌操作的重要性。 二、实验原理 油镜使用的原理 油镜，即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。 二、实验原理 细菌的单染色原理 细菌细胞微小，透明，不易观察，需染上颜色。利用单一染料对细菌进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。 染色前必须固定细菌，其目的是： 一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上。 二是增加其对染料的亲和力。常用的有加热和化学固定两种方法。固定时尽量维持细胞原有的形态。 二、实验原理 环境微生物检查原理 平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在合宜温度下培养，1-2天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜色以及质地疏松或紧密等。因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。 三、实验材料 1、菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、四联球菌，金黄色葡萄球菌 八叠球菌等斜面菌种； 2、载玻片、接种环、酒精灯、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、培养基平板，无菌水，灭菌棉签（装在试管内），试管架，酒精灯，酒精瓶，记号笔，废物缸，牙签等； 3、草酸铵结晶紫染色液、路哥氏碘液、95%乙醇、0.5%番红色液、蒸馏水； 4、微生物实验室所有仪器、玻璃器皿等 四、实验步骤 四、实验步骤 四、实验步骤 四、实验步骤 四、实验步骤 四、实验步骤 （二）显微镜油镜的使用 显微镜保养和使用中的注意事项 1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度 3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。 4.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。 5.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。 四、实验步骤 四、实验步骤 四、实验步骤 四、实验步骤 五、实验报告 1、将你自已的平板结果记录于讲义的表中并与其他同学所做的结果进行比较 。 用油镜观察大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草杆菌24h培养物，并绘图。 六、问题与讨论 1.涂片为何要固定？固定加热时间过长会怎样？ 2.使用油镜时，为什么必须用香柏油？ 3.镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直接用高倍镜或油镜观察？ 4、通过本次实验，在防止培养物的污染与防止细菌的扩散方面，你学到些什么？有什么体会。 本次实验课结束请确保油镜头擦拭干净！请第一组同学留下值日下周再见！ * * 微生物学实验 陈琼华 Tel:Email: qionghua2010@163.com 卫生 每次实验需留下4位同学值日，协助保持实验室清洁 根据公式D=λ/2n·sin(α/2 ) ，增大分母，使得D值减小，分辨率增大。 （一）环境微生物的检查和菌落观察 l．写标签 2．实验室细菌检查 (1)空气 将一个肉膏蛋白胨琼脂平板放在当时做实验的实验室，移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在空气中；将另一肉膏蛋白胨琼脂平板放在无菌室或无人走动的其他实验室，移去皿盖。15分钟后盖上两个皿盖。 现场演示 (2)实验台