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第四章 抗 体 制 药 主讲：燕大侠 13生物技术1班 第四章 抗 体 制 药 主讲：燕金蒙 13生物技术1班 抗体的定义是： 抗体是由于抗原进入机体，刺激机体免疫系统发生免疫应答，由B细胞分化成浆细胞再有浆细胞分泌的一种具有免疫球蛋白活性，能和相应的抗原发生特异性结合的特殊蛋白质。 抗体的结构： 具有4条多肽链的对称结构，其中2条较长、相对分子量较大的相同的重链（H链）；2条较短、相对分子量较小的相同的轻链（L链）。链间由二硫键和非共价键联结形成一个由4条多肽链构成的单体分子。 免疫球蛋白与抗体的关系 免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）：具有抗体活性及化学结构与抗体相似的球蛋白统称为免疫球蛋白。 抗体（Antibody）：是指能与相应抗原特异性结合具有免疫功能的球蛋白。 Ig是化学结构的概念，而抗体是生物学功能的概念。所有的抗体均是Ig，但并非所有Ig分子都具有抗体活性。 1964年，世界卫生组织举行专门会议，将具有抗体活性以及与抗体相关的球蛋白统称为免疫球蛋白(Ig)。如骨髓瘤蛋白，巨球蛋白血症、冷球蛋白血症等患者血清中存在的异常免疫球蛋白以及“正常人”天然存在的免疫球蛋白亚单位等。因而免疫球蛋白是结构及化学的概念，而抗体是生物学及功能的概念 　　是将抗体产生的细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的抗体。 单克隆抗体是针对一个抗原决定族的抗体，又是单一的B淋巴细胞克隆产生的；它的结构和特异性完全相同的高纯度抗体。 第一节 单克隆抗体 多克隆抗体与单克隆抗体 多克隆抗体：病原微生物含有多种抗原决定簇的抗原物质，因此产生的抗体制剂也是多种抗体的混合物，故称多克隆抗体。 1975年Kǒhler和Milstein首先利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备出单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb）。 单克隆抗体具有高度特异性、均一性、来源稳定、可大量生产等特点，为抗体制备和应用提供了全新的手段，还促进了基础和临床医学的发展。 一、McAb制备的一般程序 B淋巴细胞 × 骨髓瘤细胞 ↓融合 杂交瘤细胞 ↓有限稀释 ↓克隆化 纯一的单克隆细胞系 ↓ McAb 单克隆抗体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体外培养法。 (1)体内诱生法 取Balb/c小鼠，首先腹腔注射0.5ml液体石蜡或降植烷进行预处理。1-2周后，腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖，并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周，可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可获得大量单克隆抗体。 (2)体外培养法 将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中，杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体，收集培养上清液，离心去除细胞及其碎片，即可获得所需要的单克隆抗体。但这种方法产生的抗体量有限。各种新型培养技术和装置不断出现，大大提高了抗体的生产量。 降植烷是一种免疫抑制剂，可以加速肿瘤的生长，产生肿瘤细胞的小鼠腹水和血清中含有大量的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体，这种抗体的效价往往高于培养细胞上清液的100~1 000倍。杂交瘤细胞具有从亲代淋巴细胞得来的肿瘤细胞的遗传特性。如接种到组织相容性的同系小鼠或不能排斥杂交瘤的小鼠（无胸腺的裸鼠），杂交瘤细胞就开始无限地繁殖。 提前一周注射降植烷、液体石蜡、抗淋巴细胞血清等免疫抑制剂，总的来说是为了提高单克隆抗体产生的效率。 单克隆抗体的大量制备 二、细胞融合与杂交瘤细胞的 选择性培养 细胞融合的基本方法： 脾细胞 骨髓瘤细胞 混合 聚乙二醇（PEG）诱导下融合，时间＜2min，然后用培养液将融合液缓慢稀释。 细胞融合后，可产生多种融合。 　脾—脾、脾—瘤、瘤—瘤融合细胞和未融合的细胞。 常用的选择性培养: HAT培养基。 它是用次黄嘌呤(H)、氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶(T)配制的。 A能阻断DNA合成的主要途径。 三、筛选阳性克隆与克隆化 筛选阳性克隆常用的检测方法： 免疫