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病原检测面试试题及答案

1.问：PCR技术的基本原理是什么？荧光定量PCR与普通PCR的主要区别有哪些？

答：PCR（聚合酶链式反应）的核心原理是模拟DNA的天然复制过程，通过温度循环控制实现目标DNA片段的指数级扩增。具体分为三步：①变性（94-98℃）：高温使双链DNA解旋为单链；②退火（50-65℃）：引物与单链DNA的互补序列特异性结合；③延伸（72℃左右）：DNA聚合酶以dNTP为原料，从引物3端延伸合成新的DNA链。经过25-40个循环，目标片段可扩增至百万倍以上。

荧光定量PCR（qPCR）与普通PCR的主要区别体现在三个方面：①检测方式：普通PCR通过电泳观察扩增产物的有无，属于终点检测；qPCR在扩增过程中实时监测荧光信号（如SYBRGreen嵌合荧光或探针水解荧光），实现动态定量。②定量能力：普通PCR仅能定性（是否存在目标片段），qPCR通过标准曲线或Ct值（循环阈值）可准确定量初始模板浓度。③灵敏度与特异性：qPCR因实时监测避免了电泳污染，且探针法可通过荧光标记提高特异性，灵敏度通常比普通PCR高1-2个数量级。

2.问：病原微生物的抗原检测与核酸检测在检测原理、适用场景上有何差异？

答：抗原检测基于抗原-抗体特异性结合原理，通过标记抗体（如胶体金、酶）与样本中的病原体蛋白（如病毒衣壳蛋白、细菌表面抗原）结合，产生可观察的信号（如显色条带）。核酸检测则通过扩增病原体特有的核酸片段（DNA或RNA），利用荧光、电泳等技术确认目标序列存在。

适用场景差异：①窗口期：核酸检测可在感染早期（病毒复制初期）检测到低浓度核酸，窗口期短（如新冠病毒感染后1-3天可测）；抗原检测需病毒载量达到一定阈值（通常感染后3-5天），窗口期较长。②灵敏度：核酸检测灵敏度高（可检测到10-100拷贝/反应），适合确诊；抗原检测灵敏度较低（通常需10?-10?拷贝/反应），适合大规模快速筛查。③时效性：抗原检测操作简单（15-30分钟出结果），适合基层或现场快速检测；核酸检测需实验室设备（如PCR仪），耗时2-4小时，适合精准诊断。

3.问：进行咽拭子样本采集时，为保证检测准确性需注意哪些关键步骤？

答：关键步骤包括：①采样部位：咽拭子应擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，避免接触舌头、牙齿或唾液，因病原体主要定植于黏膜表面。②采样深度：需深入咽部（约悬雍垂后1-2cm），确保采集到足够的上皮细胞和分泌物。③采样力度：适度旋转擦拭，避免用力过猛导致出血（血液可能抑制PCR反应）。④样本保存：采样后立即将拭子浸入病毒保存液（含RNA酶抑制剂），避免干燥；保存液需覆盖拭子头部，且总量符合试剂盒要求（通常2-3mL）。⑤标识与转运：样本管需标注清晰的患者信息，4℃冷藏转运（24小时内检测），若超过24小时需-70℃冻存，避免反复冻融破坏核酸。

4.问：在病原检测实验室中，如何通过室内质控和室间质评确保检测结果的准确性？

答：室内质控（IQC）是实验室日常检测的核心保障，具体措施包括：①设置对照：每批次检测需加入阳性对照（已知浓度的标准品）、阴性对照（无目标病原体的样本）、空白对照（无样本的反应体系），用于监测试剂有效性和污染情况。②失控处理：若阳性对照无扩增、阴性对照出现扩增或Ct值超出均值±2SD（标准差），需立即停止检测，排查原因（如试剂失效、仪器故障、操作污染），重新检测并记录。③质控图分析：定期（如每周）绘制质控品Ct值的均值-极差图，观察趋势变化，提前发现系统误差。

室间质评（EQA）是外部机构对实验室能力的评估，实验室需：①按要求参加省级或国家级质评计划（如卫健委临检中心的病原室间质评），每年至少2次。②对质评样本进行盲样检测，严格按标准操作流程执行。③分析质评结果：若出现不符合项（如漏检、误判），需撰写整改报告，明确原因（如引物设计缺陷、操作失误）及改进措施（如更换试剂、加强培训）。

5.问：某批次新冠核酸检测出现多例假阳性结果，可能的原因有哪些？应如何排查和处理？

答：可能原因包括：①扩增产物污染：PCR实验室分区不严格（如扩增区与样本制备区交叉），导致气溶胶携带的阳性产物污染后续反应体系。②引物/探针特异性差：引物设计时未避开宿主基因组同源序列，或病毒变异导致探针结合效率下降，引发非特异性扩增。③样本交叉污染：采样时拭子接触阳性样本容器、加样时移液器吸头重复使用或未换枪头。④试剂污染：提取试剂或PCR反应液在生产/储存过程中被目标核酸污染（如质粒标准品泄漏）。

排查与处理步骤：①立即暂停该批次检测，保留原始反应管和扩增记录（如熔解曲线）。②重复检测：用新批次试剂对可疑样本重新提取、扩增，若结果转阴，提示首次检测污染；若仍阳性，需进一步确认。③环境监测：用棉签擦拭实验