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低分子肝素调控TLR4-NF-κB信号通路在溃疡性结肠炎小鼠中的作用机制研究

摘要：本研究旨在探讨低分子肝素调控Toll样受体4（TLR4）-核因子κB（NF-κB）信号通路在溃疡性结肠炎（UC）小鼠中的作用机制。通过构建UC小鼠模型，给予低分子肝素干预，检测相关指标，分析低分子肝素对TLR4-NF-κB信号通路的影响及其在改善UC病理状态中的作用。结果表明，低分子肝素可通过调控TLR4-NF-κB信号通路减轻UC小鼠的炎症反应，为UC的治疗提供了新的理论依据和潜在治疗策略。

一、引言

溃疡性结肠炎（Ulcerativecolitis，UC）是一种病因尚不十分明确的慢性非特异性肠道炎症性疾病，主要累及直肠和结肠黏膜及黏膜下层。其临床表现为腹泻、黏液脓血便、腹痛等，病情迁延不愈，且有癌变的风险，严重影响患者的生活质量。目前，UC的发病机制尚未完全阐明，但大量研究表明，肠道黏膜免疫失衡、肠道菌群失调、遗传因素以及环境因素等在其发病过程中起着重要作用。

Toll样受体4（Toll-likereceptor4，TLR4）是一种重要的模式识别受体，在天然免疫和获得性免疫中发挥着关键作用。当病原体相关分子模式（PAMPs）如脂多糖（LPS）与TLR4结合后，可激活下游的信号转导通路，导致核因子κB（nuclearfactor-κB，NF-κB）的活化。NF-κB是一种重要的转录因子，在炎症反应、细胞增殖、凋亡等过程中发挥着核心调控作用。在UC患者和动物模型中，TLR4-NF-κB信号通路常常处于异常激活状态，导致大量促炎细胞因子如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）等的释放，从而加重肠道炎症反应。

低分子肝素（Low-molecular-weightheparin，LMWH）是一种新型的抗凝血药物，具有抗凝血、抗炎、抗血栓形成等多种生物学活性。近年来，越来越多的研究发现，LMWH在多种炎症性疾病中具有潜在的治疗作用。然而，关于LMWH是否可以通过调控TLR4-NF-κB信号通路来改善UC的病理状态，目前尚未见详细报道。因此，本研究通过构建UC小鼠模型，观察LMWH对UC小鼠的治疗效果，并深入探讨其调控TLR4-NF-κB信号通路的作用机制。

二、材料与方法

2.1实验动物

选用清洁级雄性C57BL/6小鼠，体重20-22g，购自[动物供应商名称]。小鼠饲养于温度（22±2）℃、湿度（50±5）%的环境中，自由饮食和饮水，适应性饲养1周后进行实验。

2.2主要试剂和仪器

低分子肝素（[品牌名称]）；葡聚糖硫酸钠（Dextransulfatesodium，DSS，[品牌名称]）；TNF-α、IL-1β、IL-6酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒（[品牌名称]）；TLR4、NF-κBp65、IκBα抗体（[品牌名称]）；实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）试剂盒（[品牌名称]）；低温高速离心机、酶标仪、荧光定量PCR仪等。

2.3实验分组与模型建立

将小鼠随机分为正常对照组、UC模型组、LMWH低剂量组、LMWH高剂量组，每组10只。除正常对照组外，其余三组小鼠自由饮用3%DSS水溶液7天，以建立UC小鼠模型。LMWH低剂量组和LMWH高剂量组小鼠在饮用DSS水溶液的同时，分别腹腔注射低分子肝素50U/kg和100U/kg，每天1次，连续7天；正常对照组和UC模型组小鼠腹腔注射等体积的生理盐水。

2.4观察指标及检测方法

2.4.1疾病活动指数（D）评估

每天观察小鼠的体重变化、粪便性状和便血情况，根据表1的评分标准计算D。

|评分|体重下降（%）|粪便性状|便血情况|

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|0|无|正常|阴性|

|1|1-5|松散|隐血阳性|

|2|5-10|稀便|肉眼可见少量血便|

|3|10-15|水样便|肉眼可见明显血便|

|4|15|水样便|大量血便|

2.4.2结肠组织病理学检查

实验结束后，处死小鼠，取结肠组织，用4%多聚甲醛固定，常规脱水、透明、浸蜡、包埋，制成5μm厚的切片，苏木精-伊红（HE）染色，光镜下观察结肠组织的病理变化，并根据表2的评分标准进行组织学评分。

|评分|炎症程度|隐窝损伤|

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|0|无炎症|无损伤|

|1|轻度炎症，局限于黏膜层|隐窝基底1/3损伤|

|2|中度炎症，累及黏膜下