DB13-T 1781-2013 饲料中苯巴比妥、艾司唑仑、地西泮以及盐酸氯丙嗪的检测 毛细管电泳法.docxVIP

DB13T饲料中苯巴比妥、艾司唑仑、地西泮以及盐酸氯丙嗪的检测毛细管电泳法

本标准规定了饲料中苯巴比妥、艾司唑仑、地西泮以及盐酸氯丙嗪的毛细管电泳检测方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和预混合饲料中苯巴比妥、艾司唑仑、地西泮以及盐酸氯丙嗪的测定。

本标准的方法检出限：苯巴比妥为0.05mg/kg，艾司唑仑为0.05mg/kg，地西泮为0.05mg/kg，盐酸氯丙嗪为0.10mg/kg。

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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T14699.1饲料采样方法

本标准中采用下列术语和定义：

3.1毛细管电泳capillaryelectrophoresis

以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的一种液相分离技术。

3.2外标法externalstandardmethod

用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的分析方法。

原理：试样中的苯巴比妥、艾司唑仑、地西泮以及盐酸氯丙嗪经甲醇提取，固相萃取柱净化，浓缩后用毛细管电泳仪进行分离测定，以外标法定量。

4试剂和材料

除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682规定的一级水。

4.1甲醇：色谱纯。

4.2乙腈：色谱纯。

4.3磷酸二氢钠：优级纯。

4.4磷酸氢二钠：优级纯。

4.5十二烷基硫酸钠（SDS）：优级纯。

4.6苯巴比妥标准品：纯度≥99.0%。

4.7艾司唑仑标准品：纯度≥99.0%。

4.8地西泮标准品：纯度≥99.0%。

4.9盐酸氯丙嗪标准品：纯度≥99.0%。

4.10磷酸盐缓冲溶液（pH7.0）：称取磷酸二氢钠1.38g和磷酸氢二钠0.71g，用水溶解并定容至1000mL，混匀。

4.11电泳缓冲溶液：称取磷酸二氢钠2.76g、磷酸氢二钠1.42g和十二烷基硫酸钠1.0g，用水溶解并定容至1000mL，混匀，经0.45μm滤膜过滤。

4.12标准储备溶液：分别准确称取苯巴比妥、艾司唑仑、地西泮和盐酸氯丙嗪标准品各10.0mg，用甲醇溶解并定容至10mL，配制成浓度为1.0mg/mL的标准储备溶液，于4℃冰箱中保存，有效期3个月。

4.13混合标准中间溶液：分别准确吸取苯巴比妥、艾司唑仑、地西泮和盐酸氯丙嗪标准储备溶液各1.0mL，用甲醇定容至10mL，配制成浓度为100μg/mL的混合标准中间溶液，于4℃冰箱中保存，有效期1个月。

4.14混合标准工作溶液：准确吸取混合标准中间溶液适量，用甲醇稀释成系列浓度的工作溶液，现用现配。

4.15固相萃取柱：C18固相萃取柱，500mg/6mL，或相当者。

4.160.45μm有机滤膜。

5仪器和设备

5.1毛细管电泳仪：配有二极管阵列检测器（DAD）或紫外检测器（UV）。

5.2未涂层熔融石英毛细管：内径50μm，总长度60cm，有效长度50cm。

5.3分析天平：感量0.1mg和0.01mg。

5.4超声波清洗器。

5.5离心机：转速不低于4000r/min。

5.6旋转蒸发仪。

5.7氮吹仪。

5.8固相萃取装置。

5.9pH计：精度±0.01。

5.10涡旋混合器。

5.11有机滤膜：0.45μm。

6分析步骤

6.1试样制备与保存

6.2提取

称取试样5.0g（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入甲醇20mL，涡旋混合2min，超声提取20min，以4000r/min离心5min，将上清液转移至100mL圆底烧瓶中。残渣再用甲醇20mL重复提取一次，合并上清液，于40℃旋转蒸发至近干，用5mL甲醇溶解残渣，待净化。

6.3净化

将C18固相萃取柱依次用甲醇5mL和水5mL活化，将上述提取液转移至固相萃取柱中，控制流速约1mL/min，弃去流出液。用水5mL淋洗，弃去淋洗液，用甲醇5mL洗脱，收集洗脱液于10mL刻度试管中，于40℃氮吹至近干，用甲醇定容至1.0mL，经0.45μm有机滤膜过滤，供毛细管电泳分析。

6.4毛细管电泳条件

6.4.1毛细管：未涂层熔融石英毛细管，内径50μm，总长度60cm，有效长度50cm。

6.4.2检测波长：210nm。

6.4.3分离电压：25kV。

6.4.4柱温：25℃。

6.4.5进样方式：压力进样，5kPa×5s。

6.4.6运行缓冲