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技能实训海洋放线菌的分离培养

一、技能目标

掌握海洋放线菌的分离和培养技术。

二、实训器材

1.仪器设备

干热灭菌箱、高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、天平、冰箱、电炉等。

2.培养基

高氏1号培养基

3.其它器材和试剂

采集的泥样或海水、移液管、100μL的微量进样器、涂布棒、三角锥瓶、记号笔、灭

菌培养皿等。

三、技能操作

1.培养基的制备

高氏1号培养基：

可溶性淀粉20.0gKNO31.0g

MgSO·7HO0.5gKHPO0.5g

4224

FeSO·7HO0.01gNaCl0.5g

42

琼脂20.0g重铬酸钾0.025g

陈海水1000mLpH7.4～7.6

121℃灭菌20min，倾注制成平板培养基。

2.样品采集

从海域浅滩采集海泥或海水样品。海泥样本选择质地细腻无沙粒的黑色淤泥，海水样本

选择沿海排污口处的水样。采集瓶事先经过灭菌，采集后用冰袋控制温度迅速带回实验室置

于4℃冰箱中保存备用。采集回来的样品要尽快接种。

3.样品的分离

以无菌操作称取1g海泥，放入装有9mL灭菌陈海水的无菌试管中，剧烈震荡，将样品

混匀，制成1:10的样品匀液。再用1mL灭菌吸管准确吸取1:10的样品匀液1mL，放入装

有9mL灭菌陈海水的无菌试管中（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），迅速振摇，制成

-3

1:100的样品匀液。按上述操作顺序做10倍递增稀释液，以此类推分别得到浓度为10、

-4

10的样品匀液。

-3-4

各取0.1mL浓度为10、10的样品匀液，均匀地涂布于高氏1号平板培养基上，置于

30℃恒温培养箱中培养3～7d。根据长出菌株的形态、颜色等差异来区别代表性菌株并编号。

对于一些形态上类似放线菌的菌株进行划线分离得到纯培养物，再保存在4℃冰箱中。

4.结果记录：

①观察分离获得的放线菌菌落，并描述其菌落的大小、表面形状（呈崎岖、褶皱、平滑）、

气生菌丝体的形状（绒状、粉状、茸毛状）、有无同心环、菌落颜色等特征。

②将分离获得的放线菌用显微镜观察其菌丝的形态特征（包括菌丝是否分枝、横隔有无、

孢子丝的形态和着生方式等），并以生物绘图的方式绘制下来，或用显微摄影技术记录下来。