SZDB-Z 348-2019 食品中脂溶性色素的测定 超高效液相色谱串联质谱法.docxVIP

SZDBZ3482019食品中脂溶性色素的测定超高效液相色谱串联质谱法

本标准规定了食品中脂溶性色素测定的超高效液相色谱串联质谱法。适用于食品中苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ、对位红、罗丹明B、碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22等脂溶性色素的测定。

样品经乙腈提取，离心后取上清液，经HLB固相萃取柱净化，用乙腈洗脱，洗脱液经氮吹浓缩后，用乙腈水溶液定容，经超高效液相色谱分离，串联质谱检测器检测，外标法定量。

方法的检出限为0.5μg/kg，定量限为1.5μg/kg。在1.0μg/kg~100μg/kg范围内线性良好，相关系数r≥0.999。在三个添加水平下的平均回收率为85.2%~96.8%，相对标准偏差为2.3%~5.7%。

4试剂和材料

除非另有说明，本标准所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1乙腈：色谱纯。

4.2甲醇：色谱纯。

4.3甲酸：色谱纯。

4.4乙酸铵：色谱纯。

4.5乙腈水溶液（1+1，v/v）：量取100mL乙腈和100mL水，混匀。

4.60.1%甲酸水溶液：量取1mL甲酸，用水定容至1000mL，混匀。

4.75mmol/L乙酸铵溶液：称取0.385g乙酸铵，用水溶解并定容至1000mL，混匀。

4.8标准品：苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ、对位红、罗丹明B、碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22，纯度≥95%。

4.9标准储备溶液：分别准确称取各标准品10.0mg（精确至0.1mg），用乙腈溶解并定容至10mL，配制成1.0mg/mL的标准储备溶液，于18℃避光保存，有效期3个月。

4.10混合标准中间溶液：分别准确吸取各标准储备溶液1.0mL于100mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成10.0μg/mL的混合标准中间溶液，于4℃避光保存，有效期1个月。

4.11混合标准工作溶液：准确吸取混合标准中间溶液适量，用乙腈水溶液（1+1，v/v）逐级稀释成1.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L、100.0μg/L的系列混合标准工作溶液，现用现配。

4.12HLB固相萃取柱：200mg/6mL，或相当者。

4.13微孔滤膜：0.22μm，有机相。

5仪器和设备

5.1超高效液相色谱串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。

5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。

5.3离心机：转速≥10000r/min。

5.4氮吹仪。

5.5涡旋混合器。

5.6超声波清洗器。

5.7固相萃取装置。

5.8pH计。

6分析步骤

6.1试样制备

6.1.2液体试样：取代表性样品约500g，混匀，均分成两份，装入洁净容器中，密封，于4℃冷藏保存。

6.2提取

称取5.0g（精确至0.01g）试样于50mL离心管中，加入10mL乙腈，涡旋混合2min，超声提取15min，以10000r/min离心5min，取上清液于另一离心管中。残渣重复提取一次，合并上清液，待净化。

6.3净化

HLB固相萃取柱依次用5mL甲醇、5mL水活化，将提取液过柱，用5mL水淋洗，抽干，用5mL乙腈洗脱，收集洗脱液。洗脱液在40℃下氮吹至近干，用1.0mL乙腈水溶液（1+1，v/v）溶解残渣，过0.22μm微孔滤膜，供超高效液相色谱串联质谱测定。

6.4.1超高效液相色谱条件

a)色谱柱：C18柱，2.1mm×100mm，1.7μm，或相当者；

b)流动相：A为0.1%甲酸水溶液，B为乙腈；

c)梯度洗脱程序：0min~2min，20%B；2min~8min，20%~95%B；8min~10min，95%B；10min~10.1min，95%~20%B；10.1min~13min，20%B；

d)流速：0.3mL/min；

e)柱温：40℃；

f)进样量：5μL。

6.4.2质谱条件

a)离子源：电喷雾离子源（ESI）；

b)扫描方式：正离子扫描；

c)检测方式：多反应监测（MRM）；

d)毛细管电压：3.5kV；

e)源温度：150℃；

f)脱溶剂气温度：500℃；

g)脱溶剂气流速：1000L/h；

h)锥孔气流速：50L/h；

i)各目标化合物的监测离子对、锥孔电压和碰撞能量见表1。

表1目标化合物的监测离子对、锥孔电压和碰撞能量

|化合物名称|母离子(m/z)|子离子(m/z)|锥孔电压(V)|碰撞能量(eV)|

||||||

|苏丹红Ⅰ|249.1|156.0/93.0|30