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技能实训草鱼出血病疫苗的制作

一、技能目标

1.掌握草鱼出血病疫苗的制作工艺。

2.熟悉草鱼出血病疫苗的安全性检验的方法。

二、实训器材

1.仪器设备

恒温培养箱、干热灭菌箱、高压蒸汽灭菌器、台式离心机、天平、超净工作台、冰箱、

水族箱等。

2.材料、培养基和试剂

患出血病的草鱼、试验水产动物（鱼、蛙等）、营养肉汤培养基、厌气肉肝汤培养基、

琼脂斜面培养基、生理盐水、青霉素、链霉素、40%甲醛溶液、漂白粉水溶液等。

3.其它器材

接种环、解剖刀、剪刀、镊子、玻璃瓶、滴管、灭菌离心管、纱布、白瓷盘、酒精棉

球、精密pH试纸、灭菌试管、酒精灯、记号笔、培养皿（直径9cm）、注射器、水族箱等。

三、技能操作

1.灭活疫苗的制作

①用无菌操作取具有典型症状的出血病病鱼的肾、脾、肝和显症肌肉、肠等组织（含

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新鲜或速冻保存的组织），称重后剪碎，加入0.85%无菌生理盐水，经匀浆制成10浓度，

在低温下以3000r/min离心0.5h，取上清液，获得病鱼的组织浆。

②组织浆按1000Lu/mL和1000μg/mL分别加入青霉素、链霉素，再加入40%甲醛溶

液，使其最终浓度为0.1%，混匀后分装于灭菌玻璃瓶中，密封，置32℃恒温箱中灭活72h。

在灭活过程中，每天充分振荡2～3次。

③制成的灭活疫苗置4℃冰箱内保存备用。并取一部分做安全性测试。

2.pH值的检验

采用市售的pH比色计或精密试纸进行测试。pH值为5.5～7.0者为合格品。

3.无菌检验

在无菌条件下，用生理盐水将待检疫苗稀释10倍，从每管吸取0.2mL的量分别接种到

普通肉汤、厌气肉肝汤和琼脂斜面上各一管，在37℃条件下培养96h，均应无菌生长。如有

菌体生长，则为不合格品。

4.安全性检验

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①选取容积为1m的水泥池或水族箱作为试验容器，容器需配有控温和通气增氧装置。

容器在使用前用浓度100mg/L的漂白粉水溶液消毒24h，消毒后用自来水冲洗干净，并放入

自来水，曝气24h以上待用。

②选用全长为8～15cm、体质健壮、游动活泼、无任何损伤和疾病的当年草鱼种，并

在试验前用2%的食盐水浸浴5～10min。将实验鱼种放入试验容器中，于28℃水温下饲养，

观察15d，所有鱼均应活动正常。若发现有鱼种出现有出血病症状，则该批鱼种不得使用。

③取上述暂养合格的鱼种10尾，将已用无菌生理盐水稀释10倍的疫苗用无菌注射器对

鱼种作腹腔或背肌注射，注射剂量为0.3～0.5mL/尾。注射后的鱼种放入试验容器内，于25～

28℃的水体中饲养，观察15d，如发现有鱼患出血病，则该批疫苗为不合格。

5.结果与报告

①观察制成的灭活疫苗的特征，并记录在表8-5中。

表8-5草鱼出血病组织浆灭活疫苗外观、pH值与质量评价表

毒种来源外观pH值质量评价

颜色沉淀物性质

②参照行业标准SC1001-1992《草鱼出血病组织浆灭活疫苗》，对制成的疫苗进行质量

评价。