圆二色谱CD原理课件.pptVIP

圆二色性光谱及其应用

（CircularDichroism，CD）;光学活性分子对左、右圆偏光的吸收率的差值;1、自然光;从统计规律上说，自然光的光振动:

在垂直于光速的平面上遍布所有方向，

沿各方向振动的光矢量呈对称分布,

相应光矢量的振幅（光强度）相等。;（1）高亮度的点光源；?

（2）日光色。色温接近6000K；

（3）在可见光区连续光谱；

（4）高显色性，显色指数＞95；

（5）在整个寿命期内维持光色特性；

（6）高电弧稳定性；

（7）热重启能力；

（8）启动后即能达到接近最大光输出；

（9）电弧光斑小、易聚光。;自然光;双折射现象：

一束光射入各向异性晶体后有两束折射光。

尼科耳棱镜。;o光和e光：频率相同、振动方向相互垂直、平面偏振光;自然光;4、布儒斯特角;5、四分之一波片;朝光源看，

电场矢量方向按顺时针方向旋转的，称为右圆偏振光；

电场矢量方向按逆时针方向旋转的，称为左圆偏振光。;6、光的叠加;旋转方向相反的

左、右圆偏光

透过一光学

活性物质后;7、旋光色散（Opticalrotatorydispersion，ORD）;圆双折射：某个物质对于左、右圆偏光的折射率分别为nL和nR，

若nL=nR，则为光学各向同性物质；

若nL≠nR，则为光学各向异性物质；左、右圆偏光的相位改变，

若nL＞nR，透射光的偏振面右旋。

若nL＜nR，透射光的偏振面左旋。;化合物在正常情况下，处于低能的基态，电子占据所有的成键轨道（σ、π、n轨道）。如果电子吸收了外界的能量，它就从基态跃迁到激发态能级。

如果所有的跃迁仅在基态的最低振动能级和第一激发态之间，吸收光谱将是很狭窄而不连续的谱线。

由于分子的价电子跃迁总伴随着振动和转动能级的跃迁，所以，紫外分光光度计测定物质的吸收光谱，虽然有一最大吸收峰值，但都是具有一定波长宽度并相对平滑的曲线。;光的吸收;理论计算的圆二色性与该椭圆偏振光的摩尔椭圆率的关系：;圆二色性的表示;园二色＋双折射;CD谱的极值处与吸收峰一致（科顿效应，cottoneffect），因而分子中不同生色团对于谱的贡献比在ORD中更容易分辨。

ORD是渐近线，两端不回归;CD比ORD容易辨别重叠峰;CD能够提供的信息：;10、J-810圆二色光谱仪;由CDM交互形成的左、右旋圆偏光通过光学活性物质，透射光强度随时间的变化;圆二色光谱仪工作原理;PeltierCellHolder;Thepeptidebondisinherentlyasymmetricandisalwaysopticallyactive;1、氨基酸的圆二色性;2、肽的圆二色谱;Far-UV(250-170nm)

SecondaryStructure:α-helix,β-sheet,β-turn,random

TertiaryStructureClass:all-α,α+β,α/β,all-βI,all-βII

Near-UV(320-250nm)：

aromaticsidechain

Near-UV~Near-infrared(300-1000nm)：

coloredproteins;苯丙氨酸（phenylalanine，Phe）：255、261和268nm附近；

酪氨酸（tyrosine，Tyr）：277nm左右；

色氨酸（tryptophan，Trp）：279、284和291nm附近；

二硫键的变化反映在整个近紫外区。;FarUVCDspectraofpoly-L-Lys;;3、估算蛋白质二级结构含量;myoglobin;GCN4-p1;Lau,TanejaandHodges(1984)J.Biol.Chem.259:13253-13261;——chymotrypsin(allb)

——lysozyme(a+b)

——triosephosphateisomerase(a/b)

——myoglobin(alla);;pH变化引起的

肌球素变性前后CD谱的动力学变化;稀释前后的荧光和CD谱

从伸展到折叠;Kinetictracesat289nm(Aromaticsidechainregion);6、磁圆二色谱

（MagneticCircularDichroism，MCD）;实验要点;Sampleconcentration;样品杯：高度均匀的熔融石英，不会带来