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(五)浇注平板接种（教材图13－14）左手持三角瓶右手反转手掌用中指和无名指拨出棉塞(或不翻转手掌用小指和手掌拨出棉塞)左手拿平皿，以大拇指和中指将皿盖打开一缝三角瓶口经火焰烧灼迅速倾入55～60℃的培养基约15ml盖好皿盖,置于桌上轻轻旋转平皿冷凝后即为平板培养基第30页，共57页，星期日，2025年，2月5日(六)接种水样的培养皿，倒置于37℃培养24h，培养到长出明显菌落。四、结果与分析画图描述菌落形态报告稀释倍数，依菌落计算原则进行计算。五、问题和讨论培养时，为什么要把已接种的培养基倒置保温培养？第31页，共57页，星期日，2025年，2月5日菌落厚，有金黄色光泽呈圆形状，可断定为金黄色葡萄球菌菌落边缘光滑，有点湿润、粘稠的圆形可断定为大肠杆菌菌落边缘褶皱不规则、淡黄色可断定为枯草芽孢杆菌菌落与菌苔菌落菌苔第32页，共57页，星期日，2025年，2月5日(一)菌落计算原则平皿菌落的计算．可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，防止遗漏，也可借助于菌落计数器计数。对那些看来相似，并且长得相当接近，但并不相触的菌落，只要它们之间的距离至少相当于最小菌落的直径，便应该—一予以计数。对链状菌落．看来似乎是由于一团细菌在琼脂培养基和水样的混合中被崩解所致，应把这样的一条链当做一个菌落来计数，不可去数链上各个单—的菌链。若同—个稀释度中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿计数该稀释度的平均菌落数。若片状菌落少于平皿的一半时，而另—半中菌落分布又均匀，则可将其菌落数的2倍作为全皿的数目。在记下各平皿菌落数后，应算出同一稀释度的平均菌数，供下—步计算时用。第33页，共57页，星期日，2025年，2月5日(二)计算方法l、首先选择平均菌落效在30～300者进行计算，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即可用它作为平均值乘其稀释倍数。2、若有两个稀释度的平均菌落数都在30～300之间，则应按两者的比值来决定。若其比值小于2，应报告两者的平均数；若大于2，则报告其中较小的数字(见表13—6例2和例3)。3、如果所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表13—6例4)。第34页，共57页，星期日，2025年，2月5日4、若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表13—6例5)。5、如果全部稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表13—6例6)。6、菌落计数的报告，菌落在100以内时按实有数报告；大于100时，采用二位有效数字；在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数也可用10的指数来表示。在所需报告的菌落数多至无法计算时，应注明水样的稀释倍数。第35页，共57页，星期日，2025年，2月5日实验四细菌革兰氏染色简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态的方法难于对细菌细胞进行分类。革兰氏染色法法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌(G－)和革兰氏阴性菌(G＋)两大类，是细菌学上是常用的鉴别染色法。第36页，共57页，星期日，2025年，2月5日一、实验目的和内容目的：巩固无菌操作技求，掌握细菌及其结构的染色技术。二、实验材料和用具（1）?大肠杆菌（E.coli）菌液（2）革兰氏染色液(结晶紫染液、卢戈氏碘液、95％乙醇、沙黄（番红）染色液等)、（3）香柏油、二甲苯；显微镜、擦镜纸、接种环、载玻片、吸水纸、试管、小滴管、酒精灯。第37页，共57页，星期日，2025年，2月5日三、操作步骤1、制片（1）涂菌滴一滴无菌水在载玻片中央，用接种环以无菌操作方法从培养基上挑取少许菌种与玻片上水滴混匀后，在洁净无脂的载玻片上做一薄而均匀、直径约1cm的菌膜。涂菌后将接种环火焰灭菌。（2）干燥于空气中自然干燥。亦可把玻片置于火焰上部略加温加速干燥(温度不宜过高)。（3）固定目的是杀死细菌并使细菌粘附在玻片上，便于染料着色，常用加热法，即将细菌涂片面向上，通过火焰3次，以热而不烫为宜，防止菌体烧焦、变形。此制片可用于染色。第38页，共57页，星期日，2025年，2月5日2、染色（1）初染：于制片上滴加结晶紫染液，染1min后，用水洗去剩余染料。（2）滴加卢戈氏碘液，1min后水洗：（3）滴加95％乙醇脱色，摇动玻片几下即倾去乙醇，重复2～3次至紫色不再后即水洗(根据涂片之厚薄需时30s至1min)。（