宠物克隆技术研发岗位面试题及参考答案.docxVIP

第PAGE页共NUMPAGES页

宠物克隆技术研发岗位面试题及参考答案

一、专业知识题（共5题，每题8分，总分40分）

1.请简述宠物克隆技术的核心流程及其关键步骤。

参考答案：

宠物克隆技术主要基于体细胞核移植（SCNT）技术，核心流程包括：

（1）供体细胞采集：从健康宠物体内获取体细胞（如皮肤细胞），进行细胞培养。

（2）去核卵母细胞制备：从雌性供体（如兔或牛）获取卵母细胞，去除细胞核，形成去核卵母细胞。

（3）核移植：将体细胞核注入去核卵母细胞，通过电脉冲或化学方法诱导融合，形成重组卵母细胞。

（4）体外培养与激活：重组卵母细胞在体外培养条件下激活分裂，形成早期胚胎。

（5）胚胎移植：将胚胎移植到代孕母体（如代孕猫或狗）子宫内发育。

（6）产仔与验证：代孕母体分娩后，对克隆宠物进行DNA鉴定，确认遗传一致性。

解析：核心在于理解SCNT技术原理及各步骤的技术细节，需结合实际操作经验。

2.宠物克隆过程中，如何解决克隆胚胎的发育效率低的问题？

参考答案：

（1）优化卵母细胞质量：选择高成熟度、无核糖体残留的卵母细胞，提高融合效率。

（2）改进核移植技术：采用显微操作仪精确定位核移植，减少机械损伤。

（3）调整激活方案：通过多周期电脉冲或化学激活（如6-DMAP+Ionomycin），提高细胞分裂率。

（4）优化体外培养体系：添加生长因子（如bFGF、cAMP）或改良培养基，模拟体内环境。

（5）筛选优质代孕母体：选择生理状态稳定的代孕动物，提高妊娠成功率。

解析：需结合实验室常见问题，提出系统性解决方案。

3.宠物克隆技术面临的主要伦理争议有哪些？请列举并说明。

参考答案：

（1）动物福利问题：代孕母体可能因妊娠并发症受伤害，克隆宠物出生后可能存在健康缺陷。

（2）遗传多样性风险：大规模克隆可能减少基因多样性，增加遗传病传播风险。

（3）商业化伦理：克隆宠物价格高昂，可能加剧宠物交易乱象，甚至助长非法繁殖。

（4）法律监管缺失：部分国家和地区缺乏明确法规，可能导致技术滥用（如克隆濒危物种）。

解析：伦理题需结合行业法规和社会影响，体现综合思考能力。

4.在宠物克隆实验中，常用的DNA鉴定方法有哪些？如何确保克隆准确性？

参考答案：

（1）PCR-SSR分型：通过短串联重复序列（STR）分析多locus遗传标记，确认个体特异性。

（2）荧光原位杂交（FISH）：检测核型异常，确保染色体完整性。

（3）宏基因组测序：对全基因组进行比对，排除嵌合体或混合细胞污染。

（4）确保准确性措施：

-多基因验证：至少检测5-10个STR位点；

-嵌合体检测：通过单细胞PCR排查细胞异质性；

-环境DNA控制：避免实验室污染。

解析：需掌握分子生物学技术，并强调质量控制的重要性。

5.中国在宠物克隆领域的技术优势与挑战是什么？

参考答案：

优势：

-代孕技术成熟：中国兽医界在猫、狗等代孕动物管理方面经验丰富；

-产业链完整：从细胞采集到胚胎移植，配套技术体系完善；

-政策支持：部分地方政府鼓励生物技术产业化。

挑战：

-国际监管压力：欧盟等地区禁止商业克隆宠物，出口受限；

-公众接受度低：消费者对克隆宠物存在偏见，市场推广难度大；

-人才短缺：高端技术人才（如胚胎学家、遗传学家）供不应求。

解析：结合地域特点，分析行业痛点与未来方向。

二、实验操作题（共3题，每题12分，总分36分）

1.设计一份猫体细胞核移植（SCNT）的体外培养方案，并说明关键参数。

参考答案：

（1）卵母细胞成熟诱导：

-培养基：M2（含10%FCS、0.6mg/mLBSA、1μg/mL孕酮）。

-诱导条件：37℃、5%CO?，培养18-24小时。

（2）核移植操作：

-融合液：含0.3M甘露醇+0.1MHepes，pH7.2；

-电脉冲参数：200V/cm，10μs，1次/1s。

（3）胚胎激活与培养：

-激活液：6-DMAP（5μM）+Ionomycin（5μM），37℃、5%CO?，5分钟；

-培养基：KSOM（含0.5mg/mLBSA、10ng/mLbFGF），旋转培养。

关键参数：

-温度、CO?浓度需严格控制在37±0.5℃、5%；

-电脉冲强度需根据卵母细胞大小调整。

解析：题目考察实际操作能力，需结合主流实验方案。

2.如何检测克隆胚胎的嵌合体风险？请描述实验流程。

参考答案：

（1）细胞分离：通过机械消化或酶解法分离胚胎细胞，制成单细胞悬液。

（2）PCR检测：

-设计物种特异性引物（如猫的Sry基因）；

-比较细胞间DNA条带差异，若存在混合条带则提示嵌合。

（3）荧光标记验证：

-染色线粒体DNA（mtDNA）或细胞核DNA（核型），观察细胞异质性