MS培养基母液配制技术.pptxVIP

项目三、培养基配制技术;教学终极目标;工作任务;任务一MS培养基母液配制;二、母液的配制;2、微量元素

用分析天平准确称取药品，分别溶解，依次混合，最后定溶。有时KI单独配制。

3、铁盐母液

易沉淀，需单独配制，一般配成硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）与乙二胺四乙酸二钠(Na2-EDTA)的铁盐螯合剂。

用少量蒸馏水将Na2-EDTA加热溶解后，再缓缓倒入FeSO4溶液充分搅拌并加热5分钟，使其充分螯合。

4、有机物母液

分别称取药品，溶解，混合后加水定容。;5、激素母液

必需单独配制，储存于冰箱。

一般浓度为0.5-1mg/ml。

BA、IAA、NAA、IBA、2，4-D等，可先用0.1mol/L的NaOH或95%的酒精溶解，然后定溶。

KT等细胞分裂素应先溶于少量0.1mol/L的HCl，然后定溶。;ＭＳ培养基母液的配制;组成;（2）微量元素母液（100X）：

称10升量溶解在100ml水中。配1升培养基取10ml;（3）铁盐母液（100X）：

称10升量溶解在100ml水中。配1升培养基取10ml。;（4）维生素母液（100X）：

称10升量溶解在100ml水中。配1升培养基取10ml;配制母液注意几点：;任务二、MS培养基的配制与灭菌;糖;二、培养基的灭菌;过滤灭(除)菌（不耐热的物质）;实践操作;问题探究;1、无机营养元素(inorganicelement);最常用的碳源是蔗糖，葡萄糖和果糖也是较好的碳源，麦芽糖、半乳糖、甘露糖也有所应用。

使用浓度在1%—5%，常用3%

在大规模生产时，可用食用的绵白糖代替。;在细胞里主要是以各种辅酶的形式参与多种代谢活动对离体组织的生长具有明显的促进作用，主要为B族维生素。

种类：VBl(盐酸硫胺素)、VB3（泛酸）、

VB6(盐酸吡哆醇)、Vpp(烟酸)

Vc（抗坏血酸）、VH(生物素)

VB11(叶酸)、VB12（钴胺素)等。

使用浓度：

一般用量为0.1-1.0mg／L。;又叫环己六醇，在糖类的相互转化中起重要作用。

使用浓度：一般为lOOmg／L，

作用：适当使用肌醇，能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用，对细胞壁的形成也有作用。;作用：蛋白质的组成部分，也是一种有机氮化合物。是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。

种类??最常用的是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸，谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等半胱氨酸及多种氨基酸的混合物（水解酪蛋白、水解乳蛋白）等。

使用浓度：为10-200mg／L。;当有机氮为唯一氮源时，离体组织生长不良，只有在无机氮存在的条件下，才能取得理想的效果，它的主要作用是促进细胞生长。如：

酪蛋白水解物和胰蛋白水解产生的胨能增进国兰类组织的生长，300mg/L谷氨酰胺也能起到同样的作用，

精氨酸对卡特兰、万代兰未成熟的种子有刺激其生长的作用

天门冬酰胺有促进国兰类籽苗生长的作用;3、有机附加物（天然复合物）;4、植物生长调节物质(hormone);赤霉素（gibberellicacid）;*组培中的作用：主要被用于诱导愈伤组织形成，促进细胞伸长生长和促进生根。;生长素的作用具有两重性：

既促进生长，又能抑制生长、甚至杀死植物；

既促进发芽，又会抑制发芽；

既能防止落花落果，又可疏花疏果。

这取决于浓度、细胞的年龄和器官的种类。

一般低浓度促进生长，中浓度抑制生长，高浓度则杀死植物。在细胞年龄上幼年细胞比成熟细胞敏感。

生长素的应用：

农业生产中的作用：

插枝生根

防止器官脱落

诱导菠萝开花

促进果实形成

;;在促进生长方面，根对生长素最敏感。在极低的浓度下，(10-5-10-8mg／L)就可促进生长，其次是茎和芽。;吲哚乙酸：IAA（indoaceticacid）

萘乙酸：NAA（naphthaleneaceticacid）

吲哚丁酸：IBA（indolebutyriacid）

2,4-二氯苯氧乙酸：2,4—D

(2,4-dichlorophenoxybutyricacid)

另外：吲哚丙酸(IPA)、萘氧乙酸(NOA)等;IAA(吲哚乙酸);（2）细胞分裂素类;生理作用和应用：

1）促进细胞分裂和扩大

在组织培养中，当培养基缺少细胞分裂素时，细胞很少分裂、生长，加入细胞分裂素后，细胞就进行分裂，组织增大，产生愈伤组织。细胞分裂素可以使细胞横向扩大而不是伸长。

在生产中可以对绿肥