第四章酶活力的测定.pptVIP

张晓静2009.09张晓静2009.09第四章酶活力的测定第1页，共23页，星期日，2025年，2月5日第四章酶活力的测定主讲：张晓静第2页，共23页，星期日，2025年，2月5日第四章酶活力的测定

第一节酶的结构与性质(略)第二节酶活力测定方法第3页，共23页，星期日，2025年，2月5日张晓静2009.09第二节酶活力测定方法一、酶活力二、酶活力的测定第4页，共23页，星期日，2025年，2月5日张晓静2009.09一、酶活力酶活力是指酶催化某一化学反应的能力，酶活力的大小可以用在一定条件下所催化的某一化学反应的反应速率来表示，两者呈线性关系。酶反应速率越大，酶活力越高，反之越低。酶催化的反应速率可用单位时间内底物的减少量或产物的增加量来表示。在实际酶活性测定中一般以测定产物的增加量为准。酶活力的测定就是测定酶促反应的初速率。1.概念第5页，共23页，星期日，2025年，2月5日张晓静2009.09一、酶活力酶活力的大小即酶含量的多少，用酶活力单位表示,即酶单位(activityunit，U)。酶单位的定义：在一定条件下，一定时间内将一定量的底物转化为产物所需的酶量。这样酶的含量就可以用每克酶制剂或每毫升酶制剂含有多少酶单位来表示，即“U/g”或“U/mL”。世界各地实际应用的酶活力单位的定义各不相同。同一种酶往往有几种不同的单位。例如，1IU＝lμmol/min；1Kat=1mol/s2.酶活力单位第6页，共23页，星期日，2025年，2月5日张晓静2009.09一、酶活力酶活力的测定要在最适条件下进行，即最适温度、最适pH、最适底物浓度和最适缓冲液离子强度等，只有在最适条件下测定才能真实反映酶活力大小。测定酶活力大小时，通常要求底物浓度足够大，测定底物浓度的变化在起始浓度的5％以内的速率，这样可以保证所测定的速率是最初速率。此结果能比较可靠地反映酶的含量。第7页，共23页，星期日，2025年，2月5日张晓静2009.09一、酶活力3.酶的比活力酶的比活力代表酶的纯度，通常用下式表示：酶比活力=[酶活力单位数(U)/蛋白质量(mg)]有时也采用每克(g)酶制剂或每毫升(mL)酶制剂含有多少个活力单位来表示。比活力的大小可用来比较每单位质量蛋白质的催化能力。比活力是酶学研究及生产中经常使用的指标。第8页，共23页，星期日，2025年，2月5日张晓静2009.09二、酶活力的测定1.酶活力的测定步骤要求酶活力的测定方法：快速、简便、准确。酶活力测定均包括两个阶段：首先要在一定的条件下，酶与其作用底物反应一段时间，然后再测定反应液中底物或产物变化的量。第9页，共23页，星期日，2025年，2月5日张晓静2009.09二、酶活力的测定酶活力的测定步骤①底物②反应条件③反应时间④底物或产物变化量选择底物配制底物溶液确定酶促反应条件：pH、温度等准确计时并终止反应运用各种检测技术，快速、简便、准确的测定变化量第10页，共23页，星期日，2025年，2月5日张晓静2009.09二、酶活力的测定①底物：根据酶的专一性，选择适宜的底物，并配制成一定浓度的底物溶液。要求所使用的底物均匀一致，达到一定的纯度。有些底物溶液要求新鲜配制，有些则可预先配制后置冰箱保存备用。②反应条件：据资料或试验结果，确定酶促反应的温度、pH等条件。温度可选在室温(25℃)、体温(37℃)、酶促反应最适温度或其他选用的温度，一般在恒温装置内进行。pH应是酶促反应的最适pH，采用一定浓度和一定pH的缓冲溶液来保持。反应条件一经确定，在反应过程中应尽量保持恒定不变。有些酶促反应要求激活剂等其他条件，应适量添加。第11页，共23页，星期日，2025年，2月5日张晓静2009.09二、酶活力的测定④底物或产物的变化量：反应到一定时间，取出适量的反应液，运用各种生化检测技术，测定产物增加量或底物的减少量。为了准确地反应酶促反应的结果，应尽量采用快速、简便、准确的方法测出结果。③反应时间：在一定条件下，将一定量的酶液与底物溶液混合均匀，适时记下反应开始的时间。反应到一定时间及时终止反应。终止酶促反应的方法要根据酶的特性、反应底物或产物的性质以及检测方法等加以选择。常用：加热、添加酶变性剂、加入酸液或碱液、冰浴等。第12页，共23页，星期日，2025年，2月5日张晓静2009.09二、酶活力的测定2.酶活力的测定方法测定反应液中物质的变化量，可