单克隆抗体与基因工程抗体.pptVIP

第1页，共20页，星期日，2025年，2月5日多克隆抗体

(Polyclonalantibody)一.概念给动物接种抗原所获得的免疫血清或抗血清是多种抗体的混合物,它是由多种抗原决定簇刺激多株B细胞增殖分化所产生的,称为多克隆抗体.第2页，共20页，星期日，2025年，2月5日二.多克隆抗体的应用免疫学检测被动免疫治疗和紧急预防三.存在问题特异性差,用于免疫学检测容易出现交叉反应第3页，共20页，星期日，2025年，2月5日单克隆抗体

(Monoclonalantibody,McAb)一.概念:通过B细胞杂交瘤技术,获得特异性针对某一种抗原决定簇的细胞克隆，产生均一性的抗体.二.B细胞杂交瘤的类型小鼠-小鼠大鼠-大鼠小鼠-人人-人第4页，共20页，星期日，2025年，2月5日三..杂交瘤技术的原理1.亲本细胞的选择小鼠骨髓瘤细胞次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核苷转移酶(HGPRT)缺陷型免疫脾细胞经抗原免疫的BALB/c小鼠的脾脏第5页，共20页，星期日，2025年，2月5日2.细胞融合骨髓瘤细胞PEG杂交瘤细胞脾细胞融合后细胞的类型:未融合的脾细胞杂交瘤细胞未融合的瘤细胞第6页，共20页，星期日，2025年，2月5日3杂交瘤细胞的选择性培养DNA合成的途径：糖+氨基酸氨基喋呤(Aminopterin,A)TK核苷酸DNA胸腺嘧啶核苷TMP(Thymidine,T)核苷酸前体次黄嘌呤HGPRTIMP(Hypoxanthine,H)第7页，共20页，星期日，2025年，2月5日融合后细胞在HAT培养基中存活情况脾细胞（HGPRT+,TK+,不能长期生长）骨髓瘤细胞（HGPRT-,TK-，不能生长）杂交瘤细胞（HGPRT+,TK+，能够生长）第8页，共20页，星期日，2025年，2月5日4.杂交瘤细胞的筛选和克隆化筛选：免疫荧光ELISA等克隆化：有限稀释法单个细胞显微操作法软琼脂培养法第9页，共20页，星期日，2025年，2月5日5.单克隆抗体的生产体内：BALB/c小鼠体内诱发含有单抗的腹水体外：无血清培养基悬浮培养等6.单克隆抗体的纯化硫酸铵沉淀法离子交换层析A蛋白-Sepharose亲和层析第10页，共20页，星期日，2025年，2月5日四.单克隆抗体的特性高度均一性：纯度很高的均一性抗体高度专一性：只对抗原分子上某一抗原决定簇起反应大量产生及稳定性：杂交瘤细胞能在体内外无限繁殖之传代第11页，共20页，星期日，2025年，2月5日五.单克隆抗体在医学上的应用（一）用作诊断试剂1.检测淋巴细胞表面分子，区分不同分化阶段的淋巴细胞，鉴别淋巴细胞。2.鉴定病原体，准确诊断传染病。3.用于肿瘤的诊断和分型