分光光度法测定条件与操作.docxVIP

《仪器分析技术》课程-微教材

微课编号

W3401

微课名称

试剂的准备与配制

所属模块

可见分光光度分析技术

子模块

实训3.2：高锰酸钾吸收曲线的绘制

关键词

高锰酸钾，溶液的配制

是否通用

√通用农产品食品

是否重点建设

是√否

微课类型

讲授型；实验实训型

微课形式

PPT录屏+实地拍摄式

教学设计模式

任务驱动法

教学目标

熟悉分光光度法测量条件的选择及定性定量的原理

掌握高锰酸钾溶液配制方法

熟悉分光光度计的使用

教学内容

知识点

技能点

1.测量条件的选择

2.分光光度法定性定量的原理

1.高锰酸钾溶液的配制

2.分光光度计的使用

知识讲解

测定条件的选择

(1)测定波长的选择

配制一浓度适当的溶液，在分光光度计上，依次以不同的波长的入射光通过该溶液，测定吸光度（用A表示）。然后以吸光度A为纵坐标，波长λ为横坐标，在坐标纸或计算机上作图，可得到一条曲线。这条A-λ曲线称为该溶液的吸收曲线或称吸收光谱曲线。

物质的吸收曲线是分光光度法选择测定波长的重要依据。通常是选择λmax为测定波长，以提高测定的灵敏度，但若在λmax处有干扰时，在保证灵敏度的前提下，也可选择其他波长。

（2）吸光度范围的控制

根据朗伯-比耳定律推导可知：当A=0.434时，浓度的相对误差最小。吸光度读数在0.2-0.8时，浓度的相对误差小于4%。控制的方法有：

控制样品的称样量或稀释倍数来调节试液浓度。

选用不同厚度的比色皿。

（3）参比溶液的选择

溶剂参比

以纯溶液作为参比溶液，比如蒸馏水。样品中仅有待测组分与显色剂形成有色配合物，其他成分在测定波长下均无吸收。溶剂参比可以消除溶剂与吸收池的干扰。

试剂参比

如果显色剂或其他试剂在测定波长有吸收，按显色反应相同的条件，不加入样品，同样加入试剂与溶剂的混合液作参比溶液称试剂参比。试剂参比可以消除试剂所带来的各种干扰。

样品参比

如果样品基体溶液在测定波长有吸收，而显色剂不与样品基体显色时，可按与显色反应相同的条件处理样品，只是不加入显色剂的混合液作参比溶液称样品参比。

平行操作参比

用不含被测组分的样品，在相同的条件下与被测样品同时进行处理，由此得到平行操作参比溶液。

分光光度法定性定量的原理

定性分析基础

物质对光的选择吸收：不同物质吸收光谱不同；相同物质吸收光谱相同。

定量分析基础

在一定条件下，物质对光的吸收与物质的浓度成正比。一定的物质，浓度增加，λmax不变，吸收程度成比例增加

边学边练

任务：配制高锰酸钾溶液。

0.01mol/L高锰酸钾溶液配制

称取1.6g高锰酸钾于小烧杯中，加入少量水，溶解后转入1000ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀吗，贴上标签。该溶液的高锰酸钾的浓度约为0.01mol/L。

思考：配制0.0001mol/L高锰酸钾溶液100ml，问：需要量取0.01mol/L高锰酸钾溶液多少ml？如何操作？

722分光光度计的使用

使用方法

接通电源，打开仪器电源开关，打开样品室盖，预热10min;

将空白液或对照液及测定液分别装入比色杯3/4体积并用擦镜纸擦净外壁，放入样品室内,空白液一般放于最外格，样品比色杯放入位置与试管位置对应;

调好波长;

调节按钮

开盖时，调T参数调为100

合上盖，调A参数调为0;

逐步拉出样品室拉杆（听到“咔”一声），读取吸光度值(A）；

读数完打开样品室盖，再将读数写入记录本。

注意事项

样品室盖应轻开轻放；

比色皿拿其磨砂面，液体装入约3/4高度，并用擦镜纸擦净外壁，每次用完后自来水冲洗干净，倒置于滤纸上；

倒取试剂时不能在仪器表面上方操作，仪器上请勿放任何物品；

每调换一次波长，都应将空白溶液的吸光度调至“0”。

思考题

（1）怎样选择测定波长？

（2）比色测定的注意事项？