造血干细胞移植相关检验技术.pptxVIP

演讲人：日期:造血干细胞移植相关检验技术

目录CATALOGUE01移植前供者检验02移植前受者检验03植活监测技术04并发症监测检验05微小残留病检测06特色检验技术

PART01移植前供者检验

HLA高分辨配型技术基于PCR-SSO的基因分型方法流式细胞术交叉配型验证下一代测序（NGS）技术应用采用序列特异性寡核苷酸探针（PCR-SSO）技术，通过特异性探针与扩增产物的杂交反应，精确识别HLA等位基因的细微差异，分辨率可达4位数以上，显著降低移植后排斥反应风险。通过高通量测序平台对HLA基因进行全序列分析，可同时检测多个基因座，覆盖传统方法难以识别的稀有等位基因，为复杂病例提供更全面的配型数据支持。在分子分型基础上，结合流式细胞术进行供受者淋巴细胞交叉试验，评估抗体介导的免疫反应风险，进一步优化供者选择。

传染性疾病筛查项目病毒标志物检测包括HBV、HCV、HIV、CMV等病毒的血清学及核酸扩增检测（NAT），确保供者无活动性感染或潜伏病毒携带，避免移植后病毒再激活导致并发症。寄生虫及细菌感染筛查针对疟疾、弓形虫、梅毒螺旋体等病原体进行抗体检测，必要时结合PCR技术确认感染状态，保障干细胞制品的安全性。新兴病原体监测如EB病毒、HHV-6、BK病毒等嗜淋巴细胞病毒的动态监测，建立基线数据以指导移植后感染防控策略。

供体细胞功能评估免疫细胞功能分析采用混合淋巴细胞培养（MLC）和细胞毒性试验，评估供者T细胞对受者抗原的应答强度，规避过强移植物抗宿主病（GVHD）风险。集落形成单位（CFU）实验体外模拟造血微环境培养供者干细胞，观察粒细胞-巨噬细胞集落（CFU-GM）形成能力，预测移植后造血重建效率。造血干细胞计数与活力检测通过CD34+细胞流式计数及台盼蓝染色评估细胞存活率，确保移植物中干细胞数量与质量满足临床需求。

PART02移植前受者检验

基础疾病状态评估01.疾病活动度检测通过分子生物学、流式细胞术等技术评估原发病的进展程度，如白血病微小残留病（MRD）检测，为移植时机选择提供依据。02.肿瘤负荷评估采用影像学检查（PET-CT/MRI）联合肿瘤标志物检测，量化病灶范围及代谢活性，判断移植前减瘤治疗必要性。03.遗传易感性分析对遗传性血液病患者进行基因测序，明确致病突变类型，指导供者筛选和移植后监测方案制定。

脏器功能与感染筛查包含肺功能测试、心脏超声及冠脉评估，确保患者能承受预处理方案的毒性，尤其关注博来霉素相关肺纤维化风险。心肺功能综合评价除常规肝酶、肌酐外，需进行ICG清除率、GFR动态监测等精准评估，预测大剂量化疗药物的代谢能力。肝肾储备功能检测采用PCR、抗原抗体联检等技术全面排查EBV、CMV、HBV等潜伏感染，必要时进行预防性抗病毒治疗。潜伏感染病原体筛查010203

免疫抑制剂耐受性检测药物代谢基因分型通过CYP3A5、TPMT等基因检测预判环孢素、硫唑嘌呤的代谢效率，个体化调整用药剂量。免疫细胞功能分析采用淋巴细胞亚群检测、混合淋巴细胞培养（MLC）评估受体免疫状态，预测移植物抗宿主病（GVHD）风险。既往药物过敏史追溯详细记录磺胺类、抗胸腺细胞球蛋白等药物的超敏反应史，制定替代性免疫抑制方案。

PART03植活监测技术

通过PCR扩增检测供受者特异性STR位点，计算嵌合率评估植入状态，灵敏度可达1%-5%，是监测微嵌合体的金标准方法。STR/SNP嵌合体分析短串联重复序列（STR）分型技术基于高通量测序平台检测数十万个SNP位点，可精确区分供受者来源细胞，适用于单倍体相合移植等复杂嵌合体分析。单核苷酸多态性（SNP）分型技术针对特定STR/SNP位点设计引物探针，实现动态定量监测，尤其适用于早期植入失败或混合嵌合体转化的预警。实时荧光定量PCR技术

供者细胞比例动态监测流式细胞术免疫分型利用供受者HLA差异或性别染色体标记（如CD45+CD19+双标），通过多色流式检测特定细胞亚群嵌合率，可区分淋巴细胞和髓系植入。荧光原位杂交（FISH）针对性染色体（XX/XY）或特定染色体易位标记，通过细胞遗传学方法直接观察供者细胞占比，适用于性别错配移植监测。数字PCR绝对定量采用微滴式数字PCR技术对供者特异性基因标记（如HLA等位基因）进行绝对计数，检测下限达0.1%，优于传统定量PCR。

血细胞计数恢复追踪全血细胞分析动态监测通过自动化血细胞分析仪连续追踪中性粒细胞（0.5×10?/L）、血小板（20×10?/L）等关键指标，评估造血重建速度和质量。网织红细胞计数采用流式细胞术检测CD71+网织红细胞比例，反映骨髓红系造血活性，是预测移植后红细胞系统恢复的早期敏感指标。造血祖细胞培养检测通过体外甲基纤维素半固体培养体系，定量检测CFU-GM、BFU-E等集落形成单位，评估造血干细胞植入后的增殖分化潜能