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细胞培养技术员面试题库及答案解析

一、选择题（每题2分，共10题）

1.细胞培养过程中，无菌操作最关键的环节是？

A.超净工作台内的清洁度

B.操作人员的洗手消毒

C.培养皿和试剂的无菌灭菌

D.实验环境的温湿度控制

2.以下哪种培养基最适合悬浮细胞的培养？

A.RPMI-1640

B.DMEM/F12

C.F12

D.M199

3.细胞冻存时，常用的保护剂是？

A.甘露醇

B.葡萄糖

C.DMSO

D.蔗糖

4.以下哪种方法不属于细胞传代的方式？

A.有限稀释法

B.消化传代

C.机械刮取

D.原代培养

5.细胞培养过程中，pH值通常维持在多少？

A.6.5-7.0

B.7.0-7.5

C.7.5-8.0

D.8.0-8.5

答案与解析：

1.C（无菌操作的核心在于所有工具和试剂的无菌灭菌，防止外源污染。）

2.B（DMEM/F12含低盐，适合悬浮细胞培养。）

3.C（DMSO是常用的细胞冻存保护剂，降低冰晶形成。）

4.D（原代培养是首次分离细胞，不属于传代方式。）

5.B（细胞培养pH通常维持在7.0-7.5，过高或过低会影响细胞活性。）

二、判断题（每题2分，共10题）

6.细胞培养过程中，CO2培养箱的浓度通常设置为5%。

7.细胞计数时，血球计数板应先涂片后染色。

8.细胞冻存时，冻存液应缓慢降至-80℃保存。

9.细胞培养基中必须添加血清才能支持细胞生长。

10.细胞培养过程中，贴壁细胞的传代周期通常比悬浮细胞短。

答案与解析：

6.正确（CO2主要用于调节培养基pH，5%是常用浓度。）

7.错误（血球计数板计数前无需染色，直接观察活细胞即可。）

8.正确（缓慢降温可减少细胞损伤，通常-20℃→-80℃梯度保存。）

9.错误（血清非必需，可使用无血清培养基，但早期需添加。）

10.正确（贴壁细胞生长依赖基质，传代周期通常更短。）

三、简答题（每题5分，共5题）

11.简述细胞培养过程中无菌操作的关键步骤。

12.解释什么是原代细胞培养和细胞系？

13.细胞冻存和复苏时需要注意哪些事项？

14.如何判断细胞是否发生污染？常见的污染类型有哪些？

15.细胞培养基中常见的添加剂有哪些？各自作用是什么？

答案与解析：

11.关键步骤：

-手部和环境消毒（酒精擦拭）；

-超净工作台提前开启30分钟；

-培养皿和试剂灭菌；

-操作过程中避免说话和触摸口鼻；

-使用无菌吸管和工具。

12.原代细胞培养：

从组织中首次分离的细胞，通常传代次数有限，易衰老。

细胞系：

经过无限次传代仍保持活力的细胞，如HeLa、CHO等。

13.冻存注意事项：

-冻存液含DMSO（降低毒性）；

-缓慢降温至-80℃（避免冰晶损伤）；

-复苏时快速融化（37℃水浴）。

复苏注意事项：

-不可剧烈晃动；

-加入预温培养基。

14.污染判断：

-细胞形态异常（如变圆、聚集）；

-培养基浑浊（细菌污染）；

-脂滴出现（真菌污染）。

常见类型：

-细菌（葡萄球菌、大肠杆菌）；

-真菌（酵母、霉菌）；

-病毒（如腺病毒）。

15.添加剂及作用：

-血清：提供生长因子和激素；

-双抗：青霉素和链霉素（防止细菌污染）；

-L-谷氨酰胺：必需氨基酸，促进细胞生长；

-非必需氨基酸：补充培养基缺乏的氨基酸；

-β-巯基乙醇：抑制活性氧（ROS）。

四、操作题（每题10分，共2题）

16.简述细胞消化传代的步骤及注意事项。

17.如何进行细胞计数（使用血球计数板）？

答案与解析：

16.步骤：

-用PBS或培养基清洗细胞2次；

-加入消化酶（如0.25%胰酶）或胶原酶；

-观察细胞变圆，轻柔吹打；

-加入含血清的培养基终止消化；

-吸取细胞悬液，计数后传代。

注意事项：

-消化时间不宜过长（防细胞死亡）；

-避免高温或反复冻融。

17.计数步骤：

-取10μL细胞悬液加至计数板凹槽；

-盖盖玻片，显微镜下观察25×25大格；

-计算4个中方格的细胞数，乘以稀释倍数。

公式：

细胞浓度（个/mL）=(大格细胞数÷4)×10×104×稀释倍数。

五、论述题（每题15分，共2题）

18.论述细胞培养过程中常见的质量控制和标准化操作要点。

19.结合实际，谈谈如何预防细胞培养中的交叉污染问题。

答案与解析：

18.质量控制要点：

-环境：超净工作台定期检测尘埃粒子和微生物；

-试剂：培养基和血清需检测内毒素和支原体；

-操作：严格无菌规范，避免手部接触；

-记录：记录细胞生长曲线、传代次数、污染情况；

-验证：定