疫苗菌毒种培育工工艺操作规程.docxVIP

PAGE

PAGE1

疫苗菌毒种培育工工艺操作规程

文件名称：疫苗菌毒种培育工工艺操作规程

编制部门：

综合办公室

编制时间：

2025年

类别：

两级管理标准

编号：

审核人：

版本记录：第一版

批准人：

一、总则

本规程适用于疫苗菌毒种培育过程中，涉及菌毒种筛选、繁殖、鉴定、保存等环节的安全操作。要求所有参与人员严格遵守规程，确保菌毒种的纯度、安全性和有效性，防止交叉污染和生物安全风险。操作人员需具备一定的生物安全知识和技能，并经专业培训合格。规程内容遵循国家相关法律法规和行业标准。

二、操作前的准备

1.人员准备：

-操作人员需佩戴符合生物安全等级要求的防护服、手套、口罩和护目镜。

-操作前应进行手部消毒，确保双手清洁。

-操作人员应了解并熟悉本规程及应急处理流程。

2.设备准备：

-确认所有设备，如超净工作台、离心机、生物安全柜、培养箱等，均处于良好工作状态。

-检查设备是否经过消毒处理，确保无污染。

-确认所有无菌用品，如培养皿、移液器、吸头等，均已消毒并处于无菌状态。

3.环境检查：

-确认实验室生物安全柜、超净工作台等操作区域无异常，如漏水、漏气等。

-检查实验室空气质量，确保符合国家相关标准。

-确认实验室温度、湿度等环境参数在规定范围内。

4.材料准备：

-核对菌毒种样本信息，确保样本准确无误。

-准备好所需培养基、试剂、缓冲液等材料，并确保其有效性。

-检查所有试剂是否在有效期内，避免使用过期试剂。

5.安全检查：

-检查实验室安全设施，如灭火器、洗眼器等，确保其完好可用。

-确认实验室生物安全应急预案，并确保所有人员了解应急处理流程。

-对实验室废弃物进行分类，确保按照国家相关规定进行处理。

6.记录准备：

-准备操作记录表格，记录操作过程、设备使用、试剂消耗等信息。

-确保记录真实、完整，便于后续查询和分析。

三、操作的先后顺序、方式

1.操作顺序：

-首先进行环境消毒，使用适宜的消毒剂对实验室操作区域进行彻底消毒。

-接着进行设备消毒，对超净工作台、生物安全柜等操作设备进行消毒处理。

-然后进行个人防护，操作人员穿戴好防护装备，包括防护服、手套、口罩和护目镜。

-检查菌毒种样本，核对信息无误后，进行样本的初步处理，如解冻、稀释等。

-进行菌毒种接种，根据培养要求选择合适的培养基，在无菌条件下进行接种。

-将接种后的培养基放入培养箱，设定适宜的温度和时间进行培养。

-定期观察菌落生长情况，记录生长数据。

-成熟后进行菌毒种纯化，通过稀释涂布法、平板划线法等方法进行纯化。

-对纯化后的菌毒种进行鉴定，包括形态学观察、生化实验等。

-鉴定合格后，将菌毒种分装至保存容器，进行低温保存或液氮保存。

-最后，清理操作现场，回收废弃物，进行个人防护装备的脱除和消毒。

2.作业方式：

-使用无菌操作技术，避免交叉污染。

-在超净工作台或生物安全柜内进行操作，确保操作环境无菌。

-使用一次性无菌用品，如吸头、移液器等，避免重复使用。

-操作过程中，避免触碰工作台面、容器口等可能造成污染的表面。

3.异常处置：

-若发现菌落异常，如生长速度异常、形态异常等，应立即停止操作，查找原因。

-如怀疑污染，应立即更换操作区域，对污染区域进行消毒。

-若发生生物安全事故，应立即启动应急预案，按照规定程序进行处置。

-所有异常情况应及时记录，并报告相关部门。

四、操作过程中设备的状态

1.正常状态指标：

-生物安全柜：确保安全柜运行稳定，气流方向正确，风速符合标准，无泄漏现象。

-超净工作台：检查工作台照明充足，风速均匀，无异常噪音，操作区域无尘。

-培养箱：温度控制精确，波动范围在规定范围内，湿度控制稳定，运行无异常。

-离心机：运行平稳，无震动，转速准确，启动和停止无异常。

-移液器：操作精确，刻度清晰，无漏液现象，按键反应灵敏。

-洗眼器：水流压力适中，喷头无堵塞，可正常使用。

-灭火器：压力表显示正常，有效期在有效期内，位置明显，易于取用。

2.异常现象识别：

-生物安全柜：气流异常、噪音增大、漏气、电源故障等。

-超净工作台：风速不稳定、照明故障、操作区域有尘、设备故障等。

-培养箱：温度波动、湿度异常、设备噪音增大、电源故障等。

-离心机：震动加剧、转速不准确、漏液、设备过热等。

-移液器：刻度模糊、漏液、按键失灵等。

-洗眼器：水流压力异常、喷头堵塞、设备损坏等。

-灭火器：压力表显示异常、有效期过期、位置被遮挡等。

3.状态监测方法：

-定期检查：每天开始工作前和结束工作后，对设备进行常规检查。

-自动监控：利用设备自带的监测系统，实时监控设备运行状态。