精液稀释液配制技术指南.pptxVIP

动物繁殖技术主讲人：许栋

实训2：精液稀释液的配制

学习目标了解精液稀释的目的掌握稀释液的主要成份掌握精液稀释液的配制方法和操作

一、精液稀释的目的精液稀释是在精液中加入一定量按特定配方配制的、适宜于精子存活并保持受精能力的稀释液。1.延长寿命2.利用率3.保存及运输

二、稀释液的主要成份及作用稀释液：为了扩大精液容量，延长精子的存活时间及受精能力，而加入精液中的等渗溶液。精液稀释就是在精液中加入适宜于精子存活并保持受精能力的稀释液。

（一）主要成份1.奶类：牛奶、羊奶、奶粉，最好是各种鲜奶；2.卵黄：含有卵磷酯。3.糖类：果糖、葡萄糖等4.甘油（丙三醇）：三个“－OH”亲水性强5.Tris（三羟基甲基氨基甲烷，三基）：非电解胺化物。6.其它：丙二醇、生理盐水、酶类、非电解质、激素、维生素等。

（二）稀释液中各成份的作用1.稀释剂：扩大精液容量，要求必须是等渗溶液，如，奶类、糖类、生理盐水等。2.营养剂：为精子提供营养和能量等，补充精子在代谢过程中的能量消耗。精子代谢只是单纯的分解作用，不能通过同化作用将外界物质转变为自身成分。如，糖类（葡萄糖、果糖、乳糖等）、奶类、卵黄等。3.保护剂：保护精子的作用，以免受到各种不良外界环境的危害。

①降低精液中（精清）的电解质浓度精清中电解质浓度很高，生理上具有激发精子活力，有利于精子和卵子结合受精；同时也能促进精子早衰，破坏精子脂蛋白膜，使精子失去电荷聚集能力，不利于精液保存。一般常用的非电解质、弱电解质有各种糖类、氨基乙酸、甘氨酸等。

②缓冲物质的作用：（柠檬酸钠、酒石酸钾钠等）用以保持精液适当的pH值。常用的缓冲剂有柠檬酸钠、酒石酸钾钠、磷酸二氢钾以及三羟甲基氨基甲烷(Tris)等。

③防止冷休克（低温打击）的作用体温20℃影响不大20℃10℃使精子遭受冷打击而丧失活率10℃0℃精子的不可逆性死亡，即冷休克

④抗冻作用：具有抗冷冻危害的作用。一般常用于抗冻的保护物多采用甘油、糖类、二甲基亚砜（DMSO），TRIS等。⑤抗菌作用：常用的抗生素有青霉素、链霉素、氨苯磺胺素、林肯霉素、多粘菌素等。

4.其它类物质①酶类：乳酸脱氢酶，细胞色素氧化酶，琥珀酸脱氢酶，β-葡萄糖苷酸酶，谷草转氨酶，过氧化氢酶，粘蛋白酶等。②激素：催产素，PGE2，PGF2α,T等。③维生素：VC,VB2,B12,VE等。④常温保存时通入CO2可延长保存时间。(为什么？)⑤在颗粒精液中加入染料用作标志等。

三、稀释液配制的注意事项1.消毒：配制好的稀释液，瓶口用硫酸纸包好，外用布盖上，扎紧，置高压锅中，0.8kg、105℃的压力维持30min；糖类稀释液只能用0.5kg的压力，或用水煮沸30min即可。2.用于配制稀释液以及封装保存精液的一切用品，都必须消毒，使用前再用稀释液冲洗2～3次。

3.稀释液应新鲜、无菌，现用现配。4.在稀释液中加入卵黄、奶类及抗菌素等药物应在稀释液降温到35℃以下时再加入。5.稀释液加入卵黄和抗菌素前应过滤。0.02～0.2μm滤膜。6.成本低，配制方便，精子存活率高，受胎率高。

实验步骤：请列出稀释液配方应该包括哪些成份？并完成100ML5%葡萄糖溶液的配制。操作步骤：1、玻璃器皿清洗，2、消毒，3、称量葡萄糖，4、溶解，5、过滤，6、定容，7、消毒。请撰写1份处理报告。

基础液：100ML5%葡萄糖溶液稀释液：100ML5%葡萄糖溶液（80ml）+10-30%的卵黄液（20ml）

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