高效液相色谱法检验操作作业规程.docVIP

陕西香菊药业集团GMP管理文件

题目

高效液相色谱法检测标准操作规程

编码：

XJWS/QC20503

共6页

第1页

制定

审核

批准

制订日期

审核日期

同意日期

颁发部门

GMP办

颁发数量

2份

生效日期

分发单位

质量技术部、综合部

版本号

A/0

1.目标：建立高效液相色谱法标准操作规程，确保正确操作。

2.依据：《中国药典》一部。

3.范围：本标准适适用于高效液相色谱法操作。

4.责任人：QC检验员对本标准实施负责。

5.内容：

5.1.定义及概述：

5.1.1.高效液相色谱法系采取高压输液泵将要求流动相泵入装有填充剂色谱柱，进行分离测定色谱方法，注入供试品，由流动相带入柱内，各成份在柱内被分离,并依次进入检测器，用统计仪、积分仪或数据处理系统统计色谱信号

5.1.2.高效液相色谱法适适用于能在特定填充剂色谱柱上进行分离药品分析测定，尤其是多组分药品测定、杂质检验和大分子物质测定。有药品需要在色谱分离前或后经过衍生化反应，方能进行分离或检测。常见色谱柱填充剂有：硅胶，用于正相色谱；化学键合固定相，依据键合基团不一样可用于反相或正相色谱，其中最常见是十八烷基硅烷（又称ODS）键合硅胶，可用于反相色谱或离子对；色谱离子交换填料，用于离子交换色谱，是有一定孔径大孔填料，用于排阻色谱。

5.1.3.高效液相色谱仪基础由泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成。检测器最常见为可变波长紫外检测器或紫外-可见检测器。色谱信息搜集和处理常见积分仪或数据工作站进行。梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加百分比阀进行程控实现。

5.2.高效液相色谱仪使用要求：

5.2.1.按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“试验室液相色谱仪检定规程（JJG705-90）”要求作定时检定，应符合要求。

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5.2.2.仪器各部件应能正常工作，管路为无死体积连结，流路中无堵塞或漏液，在设定检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。

5.2.3.具体仪器在使用前应具体参阅各操作说明书。

5.3.操作前准备：

5.3.1.流动相制备：用高纯度试剂配制流动相，必需时照紫外分光光度法进行溶剂检验，应符合要求；水应为新鲜制备高纯水，可用重蒸水。对要求pH值流动相，应使用精密pH计进行调整。配制好流动对应经过0.45μm适宜滤膜滤过，用前脱气。应配制足量流动相立即待用。

5.3.2.供试溶液配制：供试品用要求溶剂配制成供试溶液。定量测定时，对照品溶液和样品供试溶液均应分别配制2份。供试溶液在注入色谱仪前，通常应经0.45μm适宜滤膜滤过。必需时，在配制供试溶液前，样品需经提取净化，以免对色谱系统产生污染或干扰色谱。

5.3.3.检验上次使用统计和仪器状态：检验色谱柱是否适适用于此次试验，色谱柱进出口位置是否和流动相流向一致，原保留溶剂和现用流动相能否互溶，流动相pH值和该色谱柱是否相适应，仪器是否完好，仪器各开关位置是否处于关断位置。

5.4.操作：

5.4.1.泵操作；

用流动相冲洗滤器，再把滤器浸入流动相中，开启泵。

5.4.1.2打开泵排放阀，用专用注射器从阀口抽出流动相约20ml，设置高流速（9ml/min）或用冲洗键PURGE进行充泵排气，观察出口处流动相呈连续液流后，将流速逐步回零或停止（STOP）冲洗，关闭排放阀。

5.4.1.3.将流速调整至分析用流速，对色谱柱进行平衡，同时观察压力指示应稳定，用干燥滤纸片边缘检验柱管各连接处应无渗漏。初始平衡时间通常约需30分钟，如为梯度洗脱，应在程序器上设置梯度状态，用初始化百分比流动相对色谱柱进行平衡。

5.4.2.紫外可见光检测器和色谱数据处理机操作。

5.4.2.1.开启检测器电源开关，选择光源（氘灯或钨灯），选定检测波长，待稳

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定后，测试参比和样品光路信号应符合要求，设置吸收度方法和检测响应时间（通常小于1秒），设置满刻度吸收值（适适用于统计仪）。

5.4.2.2.开启色谱处理机，设定处理方法，初步设定衰减、纸速、统计时间、最小峰面积等参数，或设定统计仪纸速和衰减。

5.4.2.3.进行检测器回零操作，检验处理机电平（LEVEL），应符合要求，或检验统计仪笔应处于设定起始位置，如有变动，可继续回零操作直至符合要求。

5.4.2.4.统计基线，待稳定后，进行处理机斜率测试符合要求方能进行操作。

5.4.3.进样操作（六通阀式进样器）

5.4.3.1.把进样器手